WWW.KNIGA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Книги, пособия, учебники, издания, публикации

 

Е В Р А З И Й С К И Й С О В Е Т ПО С Т А Н Д А Р Т И З А Ц И И, М Е Т Р О Л О Г И И И С Е Р Т И Ф И К А Ц И И

(Е А С С )

EU R O - A SfA N C O U N C IL F O R S T A N D A R D IZ A T IO N, M E T R O L O G Y AN D C E R T IF IC A T IO N

(E A S C )

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ го ст СТАНДАРТ 20

МЕТОДЫ ИСПЫ ТАНИЙ ХИМ ИЧЕСКО Й ПРО ДУКЦИИ,

ПРЕДС ТАВ ЛЯ Ю Щ ЕЙ О ПАСНО СТЬ ДЛЯ О КРУЖ А Ю Щ ЕЙ СРЕДЫ

О пределение острой токсичности для C hironom us sp.

(OECD, Test № 235:2011, IDT) Издание о ф иц иально е М инск Евр ази й ски й с о в е т по стандартизации, м е т р о л о г у и сертиф икац ии

В НАБОР

гост Предисловие Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертиф икации (ЕАСС) представляет собой региональное объединение национальны х органов по стандартизации государств, входящ их в С одружество Н езависимых Государств. В дальнейш ем возможно вступление в ЕАСС национальных органов по стандартизации других государств.

Цели, основны е принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0- «М ежгосударственная система стандартизации. О сновны е положения» и ГОСТ 1.2 -2 0 0 9 «М ежгосударственная система стандартизации.

Стандарты межгосударственные, правила, рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»

Сведения о стандарте 1 РАЗРАБО ТАН Ф едеральны м государственны м унитарным предприятием «Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, инф ормации и сертиф икации сырья, материалов и вещ еств» (ФГУП «ВНИЦСМ В»);

Техническим комитетом по стандартизации № 339 «Безопасность сырья, м атериалов и вещ еств» Феде р|алфИРЯРвнИВД^5РТЕ а пс № техническому регулированию и метрологии

В НАБОР

гост 2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт) 3 П РИ Н Я Т М еж государственны м советом по стандартизации, м етрологии и сертиф икации (протокол № от г.) За принятие стандарта проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен международному документу (Определение острой токсичности для Chironom us sp.).

П еревод с английского языка (еп).

Степень соответствия - идентичная (ЮТ)

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

гост наст оящ его ст андарт а и изменений к нем у на т еррит ории указанны х (государст венных) ст андарт ов, издаваемых в эт их государст вах.

указат елях «М ежгосударст венны е ст андарт ы». В случае пересмот ра или от мены наст оящ его ст андарт а соот вет ст вую щ ая инф ормация «М ежгосударст венны е ст андарт ы »

принадлежит национальны м органам по стандартизации этих государств

IN T E R S T A T E C O U N C IL F O R ST A N D A R D IZ A T IO N, M E T R O L O G Y A N D C E R T IF IC A T IO N

(IS C )_

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ ГОСТ

СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫ ТАНИЙ ХИМ ИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ,

ПРЕДСТАВЛЯЮ Щ ЕЙ О ПАСНОСТЬ ДЛЯ ОКРУЖ АЮ Щ ЕЙ СРЕДЫ

Определение острой токсичности для Chironom us sp.

МЬВНИЦС MB

гост Цели, основны е принципы и основной порядок проведения работ по «М ежгосударственная система стандартизации. О сновны е положения» и ГОСТ 1.2-2009 «М ежгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила, рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»

Сведения о стандарте 1 РАЗРАБО ТАН Ф едеральны м государственны м унитарны м предприятием «Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, «Безопасность сырья, материалов и вещ еств» Ф едерального агентства по техническому регулированию и метрологии метрологии 3 ПРИНЯТ М ежгосударственны м советом по стандартизации, метрологии За принятие стандарта проголосовали:

(ИСО 3166) 0 0 4 -9 7 004 - Российская Федерация RU Украина 4 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD Test № 235:2011 Chironom us sp. Acute Immobilisation Test (О пределение острой токсичности для Chironom us sp.).

Перевод с английского языка (еп).

Степень соответствия - идентичная (IDT) 5 Приказом Ф едерального агентства по техническому регулированию и ГОСТ введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫ Е

гост Информация об изменениях к наст оящ ему ст андарт у публикует ся в ежегодном информационном указат еле «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указат еле «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего ст андарт а соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном инф ормационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по т ехническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии 1 Область прим енения

2 Термины и о пред ел ени я

3 Принцип те с та

4 Информация об исследуемом в е щ е ств е

5 Стандартные вещ ества

6 Достоверность теста

7 Описание те с та

7.1 О борудование

7.2 Тестовые виды

7.3 В ода

7.4 Тестируемые растворы

8 Процедура те ста

8.1 Предварительная подготовка тестовых организмов

8.2 Условия проведения теста

9 Данные и отчет о проведении те ста

9.1 Д анны е

9.2 Отчет о проведении те ста

Приложение А (справочное) Результаты межпабораторного теста со гост Приложение В (рекомендуемое) Культивирование Chironomus rip a riu s. Приложение С (справочное) Химические характеристики воды, приемлемой для проведения те ста

В НАБОР

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫ ТАНИЙ ХИ М ИЧ ЕСКО Й ПРОДУКЦИИ,

ПРЕДСТАВЛЯЮ Щ ЕЙ ОПАСНОСТЬ ДЛЯ ОКРУЖ А Ю Щ ЕЙ СРЕДЫ

О пределение острой токсичности для Chironom us sp.

Testing of chem icals of environm ental hazard Настоящ ий стандарт устанавливает метод по определению (Chironomus sp.).

2 Терм ины и определения В настоящ ем стандарте применимы термины со следующ ими определениями:

2.1 полуэф ф ективная концентрация {Е С 50 - The concentration estim ated): Концентрация исследуемого вещества, которая приводит к угнетению подвижности (иммобилизации) 50% личинок хирономид в течение установленного периода воздействия.

Издание оф ициальное

В Н АБО Р

гост 2.2 им м обилизация (угнетение подвижности) (Im m obilisation):

личинки хирономид, неспособные изменять свое положение (ползком или за счет плавательны х движений) в течение 15 секунд после воздействия механического раздражителя, например воздействия струи воды из пипетки Пастера или встряхивания тестового сосуда, считаются неподвижны ми (иммобилизованными). Личинки движутся хаотично, и фазы высокой активности (например плавания за счет бы строго изменения формы тела в альф а-ф орму при максимальном сжатии и обратно) сменяю тся фазами полного отсутствия движения.

иммобилизованными.

3 Принцип теста воздействию исследуемого вещ ества в определенном диапазоне концентраций в воде в течение 48 ч. Иммобилизация регистрируется на 24-ый и 48-ой ч. ЕС 50 рассчитывается на 24-ый и 48-ой ч (если сущ ествую т необходимые данные).

4 Инф ормация об исследуемом веществе 4.1 Должны быть известны растворимость в воде и давление паров исследуемого вещества. Для аналитического определения использовать достоверны й аналитический метод с известной воспроизводимостью и пределом обнаружения.

4.2 Полезной также может быть инф ормация о:

- структурной ф ормуле исследуемого вещества;

- чистоте;

- стабильности в воде и на свету;

- коэф ф ициенте распределения октанол / вода, Kow\ - результатах теста на способность к биоразложению.

О писание ф изического состояния исследуемого вещ ества должно быть представлено в отчете о проведении теста.

5 С тандартны е вещества 5.1 В целях подтверждения надежности и достоверности тестовой системы и условий проведения теста необходимо регулярно тестировать стандартны е вещества. В качестве стандартны х веществ рекомендуется использовать химические вещ ества, проверенные в м ежпабораторны х и валидационных тестах. М ежлабораторны е тесты проводились с 3,5-дихлорф енолом и хлоридом калия (приложение А).

Также в качестве стандартны х вещ еств в тесте на острую токсичность для C hironom us sp. можно использовать линдан, пентахлорф енол и хлорида кадмия.

В Н АБО Р

гост веществами.

6 Д остоверность теста критерии эф ф ективности:

растворителем, иммобилизация или другие признаки недомогания или нахождение на поверхности воды) в конце теста;

- концентрация растворенного кислорода в конце теста должна составлять 3 мг/л в контрольном и тестовы х сосудах.

7 О писание теста 7.1 О борудование 7.1.1 Тестовы е сосуды и другое оборудование, контактирую щ ее с стекла или других химически инертных материалов. Для тестирования можно использовать чаш ки Петри вместимостью 50 мл (высота 3 см, (высота 7 см, внутренний диаметр использованием. Тестовы е сосуды должны быть негерметично паропленкой) для уменьш ения потерь воды вследствие испарения и предотвращ ения попадания пыли в тестируемы е растворы.

7.1.2 При тестировании также может использоваться следующ ее лабораторное оборудование:

подходящим устройством для измерения содержания растворенного кислорода в пробах малого объема);

- рН-метр;

- оборудование для определения жесткости воды;

- оборудование для контроля температуры.

Если для приготовления тестируемы х растворов используется вода из поверхностны х или подземны х источников, также необходимо оборудование для определения содержания общ его органического углерода (О О У) и (или) химического потребления кислорода (ХПК).

7.2.1 При тестировании используются личинки Chironom us riparius первого возраста, поскольку данная личиночная стадия наиболее чувствительна. Кроме того, личинки данного возраста свободно плавают и, следовательно, не испьп^ёёМН

В НАБОР

гост донных отложений. С. riparius является наиболее предпочтительным видом, также могут использоваться виды С. dilutus или С. yoshimatsui.

Тестовые организмы должны быть получены из надежного источника (желательно лабораторной культуры).

7.2.2 Личинки должны быть получены от здоровой популяции (не демонстрирую щ ей признаков стресса таких, как высокая смертность, обесцвечивание и т.д.) с известной историей (метод выращивания, отдельного тестирования, должны быть получены из одной и той же культуры. В ы ращ ивание основной культуры должно осущ ествляться в условиях (свет, температура и среда), аналогичны х условиям, которые тестирования отличается от среды для культивирования Chironom us sp., то следует включить в тестирование предварительную стадию сохранения личинок первого возраста в среде, используемой для тестирования.

среда (М4 или М7, приложение В), если C hironom us sp. выживаю т в тестирования, не проявляя признаков стресса. Любая вода, качество тестирования. Качество воды должно быть постоянны м в течение приготовления искусственны х сред приведены в приложении В.

приложении С, необходимо измерять как минимум два раза в год, или если предполагается, что качество воды могло измениться. Также необходимо определять содержание тяж елы х металлов (например водопроводной воды необходимо определять содержание хлора. При использовании природной воды необходимо измерять электрическую проводимость, содержание общ его органического углерода (О ОУ) и химического потребления кислорода (ХПК).

использовать одну и ту же воду. Это пс5% 1Й

В НАБОР

гост акклиматизации. Перед тестированием необходимо провести аэрацию воды для насыщ ения кислородом.

7.4 Тестируем ы е растворы использования растворителей и диспергаторов следует избегать. Тем некоторых случаях для получения раствора с нужной концентрацией или однородного основного раствора. Для активны х ингредиентов или растворителей или диспергаторов концентрация растворителя должна пробе. Кроме того, максимальная концентрация растворителя должна составлять 100 мкл/л или 100 мг/л в зависимости от того, какая величина меньше.

В Н АБО Р

корректировки pH. Если pH не сохраняется в диапазоне 6 — 9, то проводится повторное тестирование с регулировкой pH исходного основного раствора до pH используемой воды перед приготовлением тестируем ы х растворов. Регулирование pH, предпочтительно 0,1 М раствором HCI и 0,1 М раствором NaOH, должно проводиться таким образом, чтобы концентрация исходного основного раствора не изменялась в значительной степени и не происходили какие-либо химические реакции, например осаждение исследуемого вещества.

Для поддержания концентрации тестируем ого раствора в течение 48 ч корректировка pH в диапазоне 6 — 9 может проводиться для химических веществ, неустойчивых в данном диапазоне pH.

8 П роцедура теста 8.1 П редварительная подготовка тестовы х организмов 8.1.1 За 4 — 5 дней до добавления личинок первого возраста в отбираются из основной культуры. Для обеспечения правильного возраста кладок края сосудов для культивирования должны быть очищ ены от стары х кладок яиц за 24 ч до отбора (старые кладки также могут оставаться в сосудах для культивирования). Для начала тестирования как минимум 3, но наиболее предпочтительно 6, нитей яиц отбираю т из культуры, и даю т им В&ЭДАйтйВя, Ьдн оврем енно

В Н А БО Р

гост добавляя корм (п. 8.1.2). Личинки для тестирования выбираются случайным образом из этой партии.

При тестировании может использоваться среда, полученная от культивирования, или свежеприготовленная среда. Как правило, личинки вы лупляю тся в течение нескольких дней после закладки яиц (от 2 до 3 дней для С. riparius при 20 °С и от 1 до 4 дней для С. dilutus при 23 °С и С. yoshim atsui при 25 °С). Для тестирования необходимо использовать личинки первого возраста. Возраст личинок может быть проверен путем измерения ширины головной капсулы. На рисунках 1 и 2 изображены свежая кладка яиц и кладка яиц после вылупливания соответственно.

Рисунок 1 —Свежая кладка яиц ( 24 ч) С. riparius.

Ф ГУТЬ ВНИ Ц С М В»

В Н А БО Р

Рисунок 2 - Личинки первого возраста из практически полностью 8.1.2 Во время тестирования личинок нельзя кормить. Тем не менее, кормление до начала тестирования (т.е. непосредственно после вы лупливания) имеет значение для обеспечения 85% вы живаемости личинок в контрольной группе в конце тестирования.

Несколько капель ф ильтрата из мелкой суспензии корма для рыб (например T etraM in® или TetraPhyll® ) в количестве 0,05 - 0,5 мг на одну личинку является достаточны м для молодых личинок. В качестве корма также можно использовать зеленые водоросли. В таком случае, следует проявлять осторожность г

В Н А БО Р

гост сосуд, чтобы не допустить прививание тестовой среды водорослями, которые могут повлиять на доступность исследуемого вещества.

В качестве альтернативы корму для рыб может использоваться растительный материал, например крапива (Urtica dioca), ш елковица (.Morus alba), белый клевер (Trifolium repens) и ш пинат (Spinacia oleracea), а также другие растительные материалы (Cerophyl или альф а-целлю лоза). Количество корма, необходимое до начала теста, должно обеспечивать адекватную выживаемость. Э кстракт корма для рыб может быть получен путем кипячения суспензии корма для рыб с ф ильтрации или удаления осажденной ф ракции. С одержание общ его составляет около 3,7 г/л, только малое количество которого будет добавлено в тестовы е сосуды.

возможности проникновения в толщ у воды. Это во многом зависит от ф изико-химических свойств исследуемого вещ ества и (или) тестовой среды, а также может быть связано с процессом очистки сосудов.

поверхности тестируем ого раствояа навнш кш икн капель раствора из пипетки, что поможет им погрузиться в раствор.

Задержание личинок на поверхности может привести к получению недостоверных д анны х (например высокой смертности в контрольных диспергатора, например Твин-80 в концентрации 2 мкл/л, для снижения поверхностного натяжения тестируем ого раствора, хотя использование диспергаторов, как правило, не приветствуется (см. п.

7.4.1). Другим способом может быть ф изическое предотвращ ение поступления личинок на границу раздела воздух/раствор, например за счет использования герметичных тестовы х сосудов без свободного воздуш ного пространства или с помощ ью сеток, удерживаю щ их личинок в тестируемом растворе.

8.2 Условия проведения теста 8.2.1 Тестовы е и контрольные группы тестируемы х растворов. Личинок первого возраста Chironom us sp.

случайным образом распределяю т в тестовы е сосуды при помощи пипетки с тупым концом. Для каждой тестируемой концентрации и предварительно разделенных на четыре группы по пять личинок. Для каждой личинки необходимо обеспечиУЕ*6^*(Ш1ШЙ2 м{л тест ируемого гост тестируемого раствора также должен быть достаточны м для отбора определения концентрации воздействия).

8.2.2 Тестируем ы е концентрации 8.2.2.1 Концентрации для окончательного тестирования можно определять в тесте по подбору диапазона концентраций. Для этого на личинок воздействую т исследуемым вещ еством в широком диапазоне концентраций в течение 48 ч. Для каждой выбранной концентрации параллельны е группы.

8.2.2.2 В окончательном тесте используют, как минимум, пять концентраций исследуемого вещества, а также контрольны е пробы только с водой и растворителем (при необходимости). Контрольная используемой при тестировании. Тестируемы е концентрации должны составлять геометрическую прогрессию со знаменателем не более использования в тестировании менее пяти концентраций или наличия пологий

В Н А БО Р

Ж елательно, чтобы наибольш ая тестируемая концентрация вызывала 100%-ую иммобилизацию, а наименьш ая концентрация не приводила к появлению какого-либо очевидного эфф екта. В то же время, данны е условия являю тся второстепенными для надлежащ его определения ЕС soУсловия инкубации Тем пература воды должна быть 18 — 22 °С для С. riparius. Для С.

dilutus и С. yoshim atsui рекомендуется температура 23 °С и 25 °С, соответственно. В каждом отдельном тесте температура должна быть последовательности - 16 ч свет, 8 ч темнота, интенсивность света должна быть в пределах от 500 до 1000 лк. Полная темнота также приемлема, особенно для тестирования вещ еств, неустойчивых на свету. Тестовы е сосуды должны быть расположены в лаборатории в случайном порядке.

8.2.4 П родолжительность теста Тестирование начинается с добавления личинок в тестируемый раствор и продолжается в течение 48 ч.

8.2.5 Наблюдения необходимо проверять на присутствие иммобилизованны х личинок.

гост стереомикроскоп или световой стол. Личинки, неспособны е изменять свое положение (ползком или за счет плавательны х движ ений) в течение 15 секунд после воздействия механического раздражителя, встряхивания тестового сосуда, считаю тся неподвижными (иммобилизованными). Личинки движутся хаотично, и фазы высокой активности (например плавания за счет бы строго изменения формы тела в альф а-ф орм у при максимальном сжатии и обратно) сменяются фазами полного отсутствия движения.

Иммобилизация используется в качестве показателя-заменителя летального исхода, поскольку установить гибель личинок первого возраста достаточно трудно. В дополнение к иммобилизации также должны быть зарегистрированы лю бое нестандартное поведение или обнаруженные на 24-ый ч тестирования, не удаляю тся из тестовы х сосудов, таким образом, их иммобилизация может быть подтверждена по окончании теста. Личинки, не обнаруженны е в тестируемом растворе, считаю тся иммобилизованными.

8.2.6 Аналитические измерения 8.2.6.1 С одержание растворенного кислорода и pH измеряются, как минимум, в контрольном растворе и тестируемом растворе с наибольш ей концентрацией исследуег ло го —вещества в |нд^}л[е и в конце теста. С одержание растворенного кислорода в контрольном растворе должно соответствовать критериям достоверности теста.

Содержание растворенного кислорода в контрольны х и тестовы х сосудах должно быть представлено в мг/л. Значение pH не должно изменяться более чем на 1,5 единицы в течение теста. Температура регистрироваться непрерывно на протяжении всего теста или, как минимум, в начале и в конце теста.

измерять в контрольны х пробах, а также пробах с наименьш ей и измеренных концентраций. Однако, если доказано, что концентрация концентрации на протяжении всего теста, то результаты могут быть основаны на номинальны х или измеренны х начальных значениях.

8.2.7 Пороговый тест Пороговый тест с одной концентрацией может бы ть выполнен при практическому пределу растворимост]1 _^л^сш в© й-|---ере'де (с наименьш ей концентрацией) для демон гграции того, что. ‘CJfg

В НАБОР

гост использованием 20 личинок (партию личинок желательно разделить на четыре группы по 5 личинок), а также 20 личинок в контрольной пробе. Если процент иммобилизации составляет 15% в конце теста, описания зависимости тестируемая концентрация — отклик. Любое зарегистрировано.

9 Д анны е и отчет о проведении теста табличной ф орме с указанием значений для каждой параллельной (количество иммобилизованны х личинок в %), обнаруженная на 24-ый концентрация - отклик, наклона кривой тестируемая концентрация отклик и значения ЕС 50 с 95% -ым доверительны м интервалом. NOEC

Ф ГУГЬВ НИЦ СМ В»

В НАБОР

статистического теста, например теста Фишера.

9.1.2 Если стандартны е методы расчета Е С 50 не применимы к полученным данным, то наибольш ая концентрация, не вызывающ ая иммобилизацию, и наименьш ая концентрация, приводящ ая к 100%-ой концентраций).

9.2 О тчет о проведении теста информацию:

об исследуемом веществе:

- ф изическая природа и ф изико-химические свойства;

- данны е о химической идентиф икации, в том числе чистота исследуемого вещества;

о тестовом виде:

- источник и виды Chironom us sp., поставщ ик источника (если известен), а также используемые условия культивирования (в том числе источник, вид и количество корма, частота кормлений);

об условиях тестирования:

гост тестируемого раствора, количество личинок в одном тестовом сосуде, количество тестовы х сосудов (в том числе параллельны х) для одной концентрации;

диспергатора, используемые тестируемы е концентрации;

характеристики качества воды (pH, жесткость, электропроводность и т.д.); состав искусственной среды, если она используется;

кислорода, pH и т.д.

Результаты теста:

нестандартное поведение) в контрольной пробе и каждой тестовой пробе для каждого времени наблюдения, а также описание природы наблю даемы х эфф ектов;

- результаты и данные, полученные в тесте со стандартным веществом, при его наличии;

анализов по определению концентрации исследуемого вещества в обнаружения аналитического метода;

проведенных в течение теста;

отклик, наклон граф ика зависимости тестируемая концентрация отклик и его стандартное отклонение от подходящ ей модели;

используемые для определения ЕС50 (данны е об иммобилизации на 24-ый ч теста также должны быть указаны, если подобные измерения проводились);

- N O EC для 24 и 48 ч, при необходимости;

- обоснование лю бого отклонения от рекомендуемой процедуры теста и влияние данны х отклонений на результаты теста.

В НАБО Р

гост Результаты межлабораторного теста со стандартны ми вещ ествами - 3,5-дихлорф енолом и хлоридом калия В межпабораторном тесте со стандартны ми вещ ествами - 3,5дихлорф енолом и хлоридом калия, были получены значения ЕС50 для получения приближенны х диапазонов, с которыми могут сравниваться результаты тестирования со стандартными вещ ествами (п. 5).

3,5-дихлорф енолом (3,5-ДХФ) и хлоридом калия (KCI) Число значений М инимальное 25% процентиль Среднее 75% процентиль М аксимальное 10% процентиль

В Н АБО Р

О кончание т аблиц ы А. 90% процентиль Коэф ф ициент вариации (округленные значения) могут быть оценены следую щ им образом:

Д анны е значения следует рассматривать как ориентировочны е для изучения изменения чувствительности хироном ид из тестируемой организмов к культуре.

Значения для KCI более однородные, чем для 3,5-дихлорф енола (согласно коэф ф ициентам вариации). Некоторые характеристики KCI, биоразложению, а также больш ая тестируемая концентрация (в раз превыш ающ ая наибольш ую тестируемую концентрацию 3,5-ДХФ), необходимая для получения 50% э ф ф ^сга ^з^р о я^ю гт^пр со б ств о в а л и уменьш ению погреш ности при проё%Й$к$№теста в Лаборатории.

гост В.1 Культивирование личинок С. riparius может проводиться в чаш ке-кристаллизаторе или больш их сосудах. На дно сосуда тонким слоем от 5 до 10 мм помещ аю т мелкий кварцевый песок. Диатомовая земля (например Merck, ст 8117) также является подходящ им диатомовой земли высотой до нескольких мм). Также в качестве субстрата может использоваться ф ильтровальная бумага. После добавления субстрата в сосуд для культивирования добавляю т воду (п. В.З) на высоту до нескольких сантиметров. По мере необходимости в сосуд для культивирования добавляю т воду для восполнения потерь культивирования. При необходимости воду можно периодически заменять.

специальный инкубатор для предотвращ ения выпуска появившихся вместимости для обеспечения с в о б о д н ф ^ ^ п ^ р ^ ^ щ е н и я и роения копуляция (размеры инкубатора должны составлять как минимум 30 * 30 х 30 см).

Для минимизации инбридинга желательно регулярно проводить обмен полученными нитями яиц с другими лабораториями.

температуру или постоянную температуру 20 ± 2 °С и обеспечивать освещ енность в последовательности: 16 ч свет (интенсивность около 1000 лк), 8 ч темнота, включая получасовую ф азу рассвета или должна составлять более 60%, меньш ая влажность воздуха может препятствовать размножению.

В.З Вода для культивирования любая подходящ ая природная вода или искусственная среда. Обычно искусственны е среды (среды М4 или М7). За 24 ч до культивирования культивирования можно обновлять путем аккуратного сливания или откачивания использованной воды из сосуда для культивирования без гост минимум, один раз в месяц или при значительном ухудш ении качества воды.

В.4 Кормление личинок В.4.1 В качестве корма для личинок использую т хлопьевидный корм для рыб (TetraM in®, TetraPhyll® или другой аналогичный корм) в количестве около 250 мг на один сосуд для культивирования в сутки.

Корм даю т личинкам в виде сухого порошка или водной суспензии: 1, г хлопьевидного корма добавляю т к 20 мл воды для культивирования и перемеш иваю т до получения однородной смеси. В сосуды для культивирования добавляю т суспензию из расчета 5 мл на один сосуд (перед добавлением в сосуд суспензию встряхивают). Для личинок старш его возраста корма может быть больше.

В.4.2 Кормление регулируется в зависимости от качества воды.

Если среда для культивирования становится мутной, то количество корма необходимо уменьш ать. Д обавление корма необходимо тщ ательно контролировать. Недостаточное питание может привести к миграции личинок на дно сосуда, слиш ком обильное питание может вызывать повы ш ение активности микроорганизмов и снижение концентрации кислорода. Обе ситуации могут привести к снижению темпов роста личинок.

В Н А БО Р

В.4.3 В сосуды для культивирования также можно добавлять subspicatus, Chlorella vulgaris).

В.4.4 Кормление взрослых хирономид насыщ енный раствор сахарозы, нанесенный на ватный диск. Такое кормление способствует увеличению продолжительности жизни хирономид и улучш ению воспроизводства.

В.5 П оявление хирономид По прош ествии 1 3 — 15 дней при температуре 20 ± 2 °С в сосудах для культивирования появляются взрослые особи хирономид.

Мужские особи имеют тонкое тело и перистые усики.

В.6 О тклады вание яиц При первом появлении взрослых особей в инкубаторе все сосуды наличие кладок яиц. При необходимости для начала теста на острую токсичность или для создания новой культуры кладки яиц извлекаю т из сосудов для культивирования и переносят в небольш ие емкости, использоваться непосредственно для выращ ивания новой культуры (например 2 -

В Н АБО Р

гост после вы лупливания личинок (например 200 личинок) переносят в новый сосуд для культивирования.

При температуре 20 °С личинки первого возраста появляются через 2 - 3 дня.

В.7 Подготовка новых сосудов для культивирования устанавливаю т один раз в неделю или реже в зависимости от условий тестирования и удаления старых сосудов после появления взрослых взрослых хироном ид при минимальном контроле культивирования.

В.8 Подготовка сред для культивирования М4 и М растворов (I) микроэлементов и витаминов. Сначала готовят основные растворы (I) в деионизированной воде. Из данны х основны х растворов (I) готовят второй единственны й основной комбинированны й раствор (II) (таблица В.1). Концентрации отдельных хим ических вещ еств в среде М7 в 4 раза ниже, чем в среде М4.

В.9 П одготовка среды М комбинированны й основной раствор (II) полума]Ш-^иллдмЕ11ГОвленных

В Н АБО Р

комбинированного основного раствора (II) и определенны е объемы основны х растворов питательных веществ, указанны е в таблице В.2, доводят до метки 1 л деионизированной водой. Основной раствор подготовленную среду М7 незадолго до использования. Основной порциями. Подготовленны е среды аэрирую т и отстаивают.

Таблица В.1 — О сновны е растворы микроэлементов для сред М4 и растворы (I) НзВО з LiCI RbCI SrCI2'6H гост П родолж ение т аблицы В. растворы (1) вещества, Na2M o 0 4-2H NH4VO Ыа2ЭДТА-2Н F e S 0 4-7H - С одержание данны х вещ еств различно для сред М4 и М7.

2 - Д анны е растворы готовят индивидуально, сливаю т вместе и немедленно помещ аю т в автоклав.

3 - Д оводят до метки 1 л деионизированной водой для приготовления основного раствора (I).

4 - Д оводят до метки 1 л деионизированной водой для приготовления комбинированного основного раствора (II).

Таблица В.2 - Основные растворы питательны х вещ еств для сред М4 и М растворы вещества, N aH C KH2PO 1 - Доводят до метки 1 л деионизированной водой для приготовления основного раствора.

2 - Добавляю т к средам М4 и М7.

гост Таблица В.З - Основной раствор витаминов для сред М4 и М гидрохлорид 1 - Д оводят до метки 1 л деионизированной водой для приготовления основного раствора.

2 —Д обавляю т к средам М4 и М7 перед использованием.

основны х раствора витаминов.

В Н АБО Р

Х им ические характеристики воды, приемлемой для проведения Природная вода со следующ ими характеристиками (таблица С.1) является подходящ ей средой для содержания, культивирования и тестирования хирономид.

Таблица С.1 — Х имические характеристики воды, приемлемой для проведения теста полихлорированные биф енилы 1 - Если ожидается, что исследуемое вещ ество взаимодействует с ионами жесткости, то используется вода с меньш ей жесткостью (таким гост Ключевые слова: химическая продукция, окружаю щ ая среда, оценка острой токсичности, хирономиды Руководитель разработки, Директор

В Н А БО Р



 
Похожие работы:

«www.koob.ru Том Вуджек, Тренировка ума Выражение признательности Прежде всего я хочу выразить благодарность издательству “Doubleday”, которое с энтузиазмом отнеслось к проекту создания этой книги. Мне также хочется поблагодарить всех тех, кто помогал мне в работе над этой книгой: Питера Тэйлора, моего агента, который увидел в ней перспективу; Чарли Менендеца - за воодушевляющие беседы в утренние часы; Бранта Кови - за идеи по оформлению книги; Мегги Ривс - за постоянный контроль над ходом дела;...»

«/О /•- ? / V / с/ у ГОРОДСКОЙ УКАЗАТЕЛЬ —Г*4 : ИЛИ, А ^ В О Н А Я КНИГА s:pa*tfu, хдоофшкодо, решслсяникоеъ, &емй п ttu it. НА 1 8 4 9 годъ. По ПОРУЧЕНШ С. ПЁТЕРБУРГСКАГО ОБЕРЪ-ПОЛИЩЙМЕЙСТЕРА Свиты ЕГО ИМПЕРАТОРСКАГО ВЕЛИЧЕСТВА ГЕНЕРАДЪ-MAIOPA ГАЛАХОВА состдвилъ Ц. V Литсйню$ части Приставъ Исполпитсдьныхъ д*дъ 4 if Цыловъ. С А Н К Т П Е X Б Г Б У Р ГЪ. Въ многолюдныхъ городахъ, гдЬ разви-пе общественной возбуждаетъ вей роды деятельности, каждый изъ жи­ ЖИЗНИ телей встрЬчаетъ почти ежедневно...»

«ЕЖЕКВАРТАЛЬНЫЙ ОТЧЕТ Открытое акционерное общество Акционерная нефтяная Компания Башнефть Код эмитента: 00013-A за 2 квартал 2011 г. Место нахождения эмитента: 450008 Россия, Республика Башкортостан, К. Маркса 30 Информация, содержащаяся в настоящем ежеквартальном отчете, подлежит раскрытию в соответствии с законодательством Российской Федерации о ценных бумагах Президент Дата: 12 августа 2011 г. А.Л. Корсик подпись Главный бухгалтер Дата: 12 августа 2011 г. А.Ю. Лисовенко подпись Контактное...»

«Книга рецептов для мультиварки Kambrook APR401 kambrook.ru Книга рецептов для мультиварки Kambrook APR401 Книга рецептов для мультиварки Kambrook APR401 Содержание Рыба и морепродукты Мясо 32 Судак на пару 46 Горчично-медовые свиные ребра Каши 19 Сливочный суп с семгой и креветками 35 Семга на пару 48 Свинина под сыром 6 Каша рисовая 21 Борщ 36 Лосось в кунжутной пасте 49 Карбонад к завтраку 7 Каша манная 22 Грибной суп 37 Рыба в томатном соусе 50 Солянка по-грузински 8 Каша овсяная 24 Крем-суп...»

«КРУГЛЫЙ СТОЛ Совета Федерации ПОВЫШЕНИЕ КАЧЕСТВА ПРОГНОЗИРОВАНИЯ И ЭФФЕКТИВНОСТИ АДМИНИСТРИРОВАНИЯ НЕНЕФТЕГАЗОВЫХ ДОХОДОВ В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ г. Светлогорск Калининградской области, 7 апреля 2008 года ИЗДАНИЕ СОВЕТА ФЕДЕРАЦИИ СОДЕРЖАНИЕ ИНФОРМАЦИЯ о круглом столе................................ 4 СТЕНОГРАММА ЗАСЕДАНИЯ круглого стола....................... 6 РЕКОМЕНДАЦИИ круглого стола..............................»

«ДОРЕВОЛЮЦИОННЫЕ ИЗДАНИЯ А.С.ПУШКИНА И ЛИТЕРАТУРА О НЁМ ИЗ ФОНДОВ БИБЛИОТЕК, МУЗЕЕВ И АРХИВОВ БЕЛАРУСИ СВОДНЫЙ КАТАЛОГ 2000 Минская областная библиотека им. А.С.Пушкина Пушкинский информационный центр Дореволюционные издания А.С.Пушкина и литература о нём из фондов библиотек, музеев и архивов Беларуси (Сводный каталог) Минск 2000 г. 1 СОДЕРЖАНИЕ Содержание От составителей Полные собрания сочинений Собрания сочинений Сочинения Избранные сочинения Сборники Отдельные произведения Прижизненные...»

«Преподобный Элвуд Скотт Рай, святой город и слава трона (сокращенная версия). 1 В начале 20-го века Бог дал Сенеке Соди славное (Второзаконие 33:27). Он должен преобразовать твоих переживание пребывания сорока дней на небесах. Эта книга врагов в твоих друзей, и ангелы, которые так верно охраняли изменит вашу жизнь и даст вам надежду, поможет вам мое смертное тело, будут охранять твою душу. Он пожал отложить в сторону все проблемы и акцентировать внимание мою руку, снова и снова поцеловал меня,...»

«А. МОНАСТЫРСКИЙ, Н. ПАНИТКОВ, Г, КИЗЕВАЛЬТЕР, С. РОМАШКО, И. МАКАРЕВИЧ, Е. ЕЛАГИНА ПОЕЗДКИ ЗА ГОРОД ( 3 т. ) Москва, 1985 г. 1 От авторов В третьем томе “Поездок за город” собраны документы акций, сделанных нами на протяжении последних двух лет. Акции расположены не в хронологическом порядке: в особый раздел выделены шесть акций серии “Перспективы речевого пространства”. Мы приносим искреннюю благодарность С.Хэнсген, И.Кабакову, С.Летову, И.Бакштейну, Штеффену Андре и другим за деятельную...»

«№ _ г. Екатеринбург Об утверждении комплексной программы Свердловской области Поддержка социально ориентированных некоммерческих организаций в Свердловской области на 2014–2016 годы Во исполнение пункта 5 постановления Правительства Российской Федерации от 23.08.2011 № 713 О предоставлении поддержки социально ориентированным некоммерческим организациям, статьи 4 Закона Свердловской области от 27 января 2012 года № 4-ОЗ О государственной поддержке некоммерческих организаций в Свердловской...»

«№2/35, ноябрь 2009-2010 В номере: В номере: 9 декабря - День Героев Отечества а Сказк в 2.0 иро ЛогоМ я щимис в для уского зовано уча класса цев М и Реал индей 6а а вой Сказк акаро В И., М ченко евой р Коров Бонда ых С., де, А. Сед приро ка в репаш ате Че, в сал те в золо лесные капот, ко р,.бампе, крышка, пороги арки а багажник угие приятные др и многие. мелочи. вке на выста ханика +автоме авто ий риевск Павел Па Ежемесячное информационне издание Оновано в сентябре 2000 года Тираж 1 экз....»

«ВВЕДЕНИЕ Изучение слова и предложения как основных единиц языка является важнейшей задачей лингвистики. Большую роль в его изучении играет теория валентности, которая уже несколько десятилетий остается одним из важных направлений лингвистики. Почти за полстолетия теория валентности прошла утомительный путь и превратилась в одно из важнейших направлений современного синтаксиса. Несмотря на довольно длинную традицию, теория валентности остается актуальной и в наше время. Причина заключается в...»

«01Апр Убийство на улице Шляпиной Самое главное событие прошлой недели – убийство молодой женщины на улице Веры Шляпиной. Весна ещё только на старте, а межличностные и межполовые отношения уже приобретают кровавую окраску. Трагедия произошла в ночь с 28 на 29 марта. В час ночи в дежурную часть ОВД от диспетчера станции скорой помощи АЦГБ поступило сообщение о том, что в городе Алапаевске в самом центре находится женщина с ножевым ранением в области спины. Скорее всего, удар такой силы был...»

«Михаил Булгаков Книжная лавка http://ogurcova-portal.com/ Белая гвардия Михаил Афанасьевич Булгаков Белая гвардия Посвящается Любови Евгеньевне Белозерской Пошел мелкий снег и вдруг повалил хлопьями. Ветер завыл; сделалась метель. В одно мгновение темное небо смешалось с снежным морем. Все исчезло. – Ну, барин, – закричал ямщик, – беда: буран! Капитанская дочка И судимы были мертвые по написанному в книгах сообразно с делами своими. ЧАСТЬ ПЕРВАЯ Велик был год и страшен год по рождестве...»

«Вестник РАМ им.Гнесиных 2011 №2 Г.Шамилли МУЗЫКАЛЬНАЯ РЕЧЬ КАК КАРТИНА МИРА: К ПРОБЛЕМЕ АРХИТЕКТОНИКИ ИРАНСКОЙ КЛАССИЧЕСКОЙ МУЗЫКИ (м йе да тгх)1. Настоящая статья основана на некоторых положениях теории музыкального текста М.Г.Арановского, затрагивающих проблему взаимодействия музыкального языка и музыкальной речи2. I Цель статьи состоит в том, чтобы показать специфику соотношения музыкального языка и музыкальной речи в пространстве той картины мира, которая, очевидно, сложилась к XIII веку...»

«1 Божественные сказы земель славянских Записала Анна Зубкова Под редакцией Владимира Антонова 2 Содержание ПРЕДИСЛОВИЕ ЛАДА Сказ о двице-золотые косы ·············································································6 Сказ о странствиях Ивана в неведомой стране ··········································· 15 КУРГАН-БАШИ Сказ о Радосвете и его рати············································································· 26 ВАСИЛЁК Сказ о золотой...»

«Муниципальное бюджетное общеобразовательное учреждение средняя общеобразовательная школа №1 г. Кимовска Утверждено Принято педсоветом Рассмотрено МО (пр. № 32 от 30.08.13 ) (пр. № 11 от 30.08.13) учителей естественно-математического цикла Директор МБОУ СОШ № 1 (пр. № 1 от 29.08.13) _/Хлюстова Г.П./ Рабочая программа по географии 6-8 класс учитель географии Тарасова Л.Е. г.Кимовск Пояснительная записка Рабочая программа разработана в соответствии с Программой по географии для 6-10 классов...»

«1 5 класс Реализация рабочей программы Количество часов в неделю Количество часов в год 2 70 Осуществление представленной рабочей программы предполагает использование следующего учебно-методического комплекта: учебник Примерная Авторская программа программа Основного общего образования название литература литература литература Автор В.Я.Коровина, В.Я.Коровина В.П.Журавлёв, В.И.Коровин Издательство Москва Москва Москва Просвещение Просвещение Просвещение Год издания 2009 2009 Практическая часть...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Амурский государственный университет Кафедра китаеведения УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС ДИСЦИПЛИНЫ ПРАКТИЧЕСКИЙ КУРС ВОСТОЧНОГО ЯЗЫКА Основной образовательной программы по направлению подготовки 032300.62 Регионоведение Благовещенск 2012 УМКД разработан Калитой Е.В., старший преподаватель Рассмотрен и рекомендован на заседании кафедры...»

«Информационные технологии в образовании Е.Н. Балыкина Сущностные характеристики электронных учебных изданий (на примере социально гуманитарных дисциплин) В данной работе кратко затрагиваются аспекты развития компью терного продукта учебного назначения: от первой обучающей системы на базе ЭВМ до электронного учебного издания (ЭУИ); подробно рас сматриваются преимущества и недостатки электронного гипертекста, возможности и особенности, позволяющие гипертексту стать принци пиально новой...»

«Автор рисунка Ainippa Malakion Содержание От редакции 2 Наши друзья 23 Пишем любовные сцены 25 Объявления 35 Стихи Дарья Иванова 9 Марина Киевская 15 Евгений Лесик 20 Борис Поляков 21 Иван Гладких 27 Серж Антонов 27 Ева Мидлер 29 Алексей Сажнев 33 Проза Тас-Аксу Любовь Ландина Андрей Евсеенко Виктор Виров Рисунки Ainippa Malakion Обложка, 22, Светлана Стихач Готе Коте 14, Здравствуйте, дорогие читатели!!! Вот и вышел 16 номер газеты Беседы у камина. Это черно-белый номер, и этой идее подчинено...»




 
© 2014 www.kniga.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Книги, пособия, учебники, издания, публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.