WWW.KNIGA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Книги, пособия, учебники, издания, публикации

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

«Настоящее изобретение относится к новому белку (обозначенному как INSP181) и его производным, идентифицированному в настоящей заявке как липокалин, и к применению этого ...»

-- [ Страница 1 ] --

011816

Настоящее изобретение относится к новому белку (обозначенному как INSP181) и его производным, идентифицированному в настоящей заявке как липокалин, и к применению этого белка и последовательностей нуклеиновой кислоты, содержащей гены, кодирующие указанный белок, для диагностики,

профилактики и лечения заболеваний.

Все цитируемые в настоящем описании публикации, патенты и патентные заявки включены в описание посредством ссылки в полном объеме.

Область техники, к которой относится изобретение В настоящее время в области разработки лекарственных средств происходят фундаментальные изменения в связи с приходом эры функциональной геномики. Термин "функциональная геномика" применяется к способам использования средств биоинформатики для приписывания функций последовательностям белков, представляющих интерес для специалистов. Такие средства становятся все более необходимыми, и это связано с тем, что оснащение научно-исследовательских лабораторий, занимающихся определением функций последовательностей этих белков, пока не дает возможности быстро обрабатывать все нарастающий поток данных о последовательностях этих белков.

Поскольку эффективность и точность методов биоинформатики возрастают, то эти методы быстро вытесняют стандартные методы биохимической характеризации. Действительно, современные средства биоинформатики, используемые для идентификации белков по изобретению, позволяют получать окончательные результаты с достаточно высокой степенью достоверности.

Различные институты и коммерческие организации занимаются обработкой непрерывно поступающих данных о последовательностях, и на основе полученных результатов они приходят к важным открытиям. Однако необходимость в идентификации и характеризации других генов и полипептидов, кодируемых этими генами, в целях их дальнейшего исследования и поиска новых лекарственных средств, все еще остается актуальной.

Липокалины представляют собой небольшие секретируемые белки, которые, как полагают, вовлекаются в транспортировку небольших гидрофобных молекул. Липокалины характеризуются мультидоменной структурой, включающей домен связывания лиганда, который в типичном случае вовлекается в процесс связывания малых гидрофобных молекул, и консервативный домен связывания с рецептором клеточной поверхности, который в типичном случае вовлекается в процесс связывания предположительного рецептора на клеточной поверхности, который может быть общим более чем для одного липокалина, и открытый конец складчатой структуры, которая формирует макромолекулярный комплекс, вовлекающий, возможно, рецептор клеточной поверхности.





Несмотря на большое разнообразие на уровне последовательности, липокалины характеризуются структурной гомологией: один восьмицепочечный антипараллельный -цилиндр с присоединенной спиралью отчетливо формирует характерную "складчатую структуру липокалина". Один конец цилиндра открыт для поступления растворителя и содержит сайт связывания лиганда. Совокупность четырех петель соединяющихся цепей придает специфичность процессу связывания лиганда.

Самые близкородственные представители семейства липокалинов отличаются наличием трех характерных мотивов в последовательности. Представители данной группы включают ретинолсвязывающий белок; пурпурин; белок, связывающий ретиноевую кислоту; альфа-2-микроглобин; крупный белок мочи; билинсвязывающий белок; альфа-крустацианин; белок 14, характерный для беременности, беталактоглобин; нейтрофильный липокалин и белок choroid plexus. Липокалины Outlier классифицируются как таковые, поскольку они содержат два или менее консервативных мотива последовательности, и указанные белки включают одорантсвязывающий белок, белок железы фон Эбнера, пробазин и афродизин.

В связи с вышесказанным идентификация липокалинов чрезвычайно важна в свете возрастающего понимания путей, лежащих в основе развития некоторых болезненных состояний и ассоциированных с ними болезненных состояний, и для разработки более эффективных подходов в генной и/или лекарственной терапии для лечения указанных расстройств.

Изобретение Настоящее изобретение основано на обнаружении того факта, что белок человека, называемый в настоящем описании как INSP181, представляет собой липокалин.

Настоящее изобретение основано на обнаружении того факта, что полипептиды по настоящему изобретению осуществляют положительную регуляцию Т-хелперных цитокинов 2 (Th2), более конкретно интерлейкина-10 (IL-10), интерлейкина-4 (IL-4) и интерлейкина-5 (IL-5). Полипептид INSP181 был исследован на его способность воздействовать на секрецию цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови человека (МКПК), стимулированными митогеном - конкавалином А (ConA). Было показано, что данный полипептид стимулирует секрецию IL-10, IL-4 и IL-5 из ConA-стимулированных МКПК человека при тестировании в разведении 1/10 (46,2 мкг в тесте). Не был выявлен эффект на уровне IFN-, TNF- или IL-2.

Кроме того, неожиданно было обнаружено, что полипептиды по настоящему изобретению демонстрируют неожиданно ограниченную экспрессию в образцах биопсии кожи, и в особенности в образцах биопсии кожи, взятых при псориазе. В общих чертах, процедура состояла в том, что праймеры, специфичные для INSP181, исследовали с использованием набора примерно из 100 образцов нормальной ткани человека и пораженных заболеванием, представляющих первичные клетки и клеточные линии, а также 44 образцов биопсии ободочной кишки и повздошной кишки от индивидуумов с воспалительным заболеванием кишечника и 39 образцов биопсии, взятых из вариантов клинического испытания IL-18-связывающего белка (IL18BP). Полученные результаты показаны в табл. 3 и 4 и проиллюстрированы графически на фиг. 12 и 13. Неожиданно оказалось, что экспрессия INSP181 отмечается на низком уровне только в образцах кожи (0,16% от GAPDH) (табл. 5, фиг. 12) и в образцах биопсии кожи от пациентов с псориазом (положительный ответ в случае 19/39 образцов) (табл. 4, фиг. 13). Результаты, полученные с использованием второй пары праймеров, специфичных для экзона 4/6 (прямой праймер в экзоне 4 и обратный праймер в экзоне 6), подтвердили специфичность эффекта для кожи.





В первом аспекте настоящее изобретение относится к полипептиду, где указанный полипептид:

(i) включает аминокислотную последовательность или состоит из аминокислотной последовательности, которая представлена в виде SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: или SEQ ID NO: 70;

(ii) представляет собой фрагмент, который является липокалином или имеет общую антигенную детерминанту с одним или несколькими полипептидами по п.(i); или (iii) представляет собой функциональный эквивалент по п.(i) или (ii).

Предпочтительно полипептид по первому аспекту изобретения состоит из аминокислотной последовательности или включает аминокислотную последовательность, которая представлена в виде SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 24, представляет собой ее фрагмент, который функционирует как липокалин, или имеет общую антигенную детерминанту с таким полипептидом; или является функциональным эквивалентом такого полипептида.

Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 2, называется далее в тексте как "полипептид экзона 1 INSP181". Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 4, называется далее в тексте как "полипептид экзона 2 INSP181". Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 6, называется далее в тексте как "полипептид экзона 3 INSP181". Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 8, называется далее в тексте как "полипептид экзона 3 INSP181-SV1". Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 10, называется далее в тексте как "полипептид экзона 4 INSP181SV1". Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 12, называется далее в тексте как "полипептид экзона 4 INSP181". Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 14, называется далее в тексте как "полипептид экзона 5 INSP181". Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 16, называется далее в тексте как "полипептид экзона 6 INSP181".

SEQ ID NO: 18 получают путем объединения SEQ ID NONO: 2, 4, 6, 12, 14 и 16. Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 18, называется далее в тексте как "полипептид INSP181".

SEQ ID NO: 24 получают путем объединения SEQ ID NONO: 2, 4, 8, 10, 14 и 16. Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 18, называется далее в тексте как "полипептид INSP181-SV1". Белок INSP181-SV1 содержит 25 аминокислотных вставок в стартовом кодоне 4.

Второй клон INSP181-SV1 (INSP181-SV1-полиморф) был идентифицирован при исследовании пула, содержащего кДНК, полученные из слюнной железы, надпочечника, глаза и универсальной эталонной матрицы РНК Stratagene, которая содержит кДНК INSP181-SV1. Указанный клон содержит нуклеотидные замещения А275С и G340A, которые приводят к аминокислотным замещениям N92T и G114S.

Указанные варианты рассматриваются как проявления полиморфизма в последовательности INSP181.

Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 36, называется далее в тексте как "полипептид-полиморф N92T экзона 3 INSP181" и включает аминокислотное замещение N92T. Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 38, называется далее в тексте как "полипептид-полиморф N92T экзона 3 INSP181-SV1" и включает аминокислотное замещение N92T.

Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 40, называется далее в тексте как "полипептид-полиморф INSP181N92T". SEQ ID NO: 40 получают путем объединения SEQ ID NONO: 2, 4, 36, 12, 14 и 16.

Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 44, называется далее в тексте как "полипептид-полиморф INSP181-SV1 N92T". SEQ ID NO: 44 получают путем объединения SEQ ID NONO: 2, 4, 38, 10, 14 и 16.

Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 56, называется далее в тексте как "полипептид-полиморф G114S экзона 3 INSP181-SV1" и включает аминокислотное замещение G114S.

Полипептид, имеющий последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 58, называется далее в тексте как "полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S". SEQ ID NO: 58 получают путем объединения -2SEQ ID NONO: 2, 4, 8, 56, 14 и 16.

Не претендуя на какую-либо теорию, заявители лишь предполагают, что полипептид INSP181, полипептид INSP181-SV1, полипептид-полиморф INSP181 N92T, полипептид-полиморф INSP181-SV1 N92T и полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S могут включать на N-конце сигнальный пептид из 20 аминокислот.

Экзон 1 в полипептиде INSP181 и в полипептиде INSP181-SV1 без этой предполагаемой сигнальной последовательности показан в виде SEQ ID NO: 20 и далее в тексте называется как "зрелый полипептид экзона 1 INSP181". Последовательность полипептида INSP181 без этой предполагаемой сигнальной последовательности показана в виде SEQ ID NO: 22 и далее в тексте называется как "зрелый полипептид INSP181". Последовательность полипептида INSP181-SV1 без этой предполагаемой сигнальной последовательности показана в виде SEQ ID NO: 26 и далее в тексте называется как "зрелый полипептид INSP181-SV1". Последовательность полипептида-полиморфа INSP181 N92T без этой предполагаемой сигнальной последовательности показана в виде SEQ ID NO: 42 и далее в тексте называется как "зрелый полипептид-полиморф INSP181 N92T". Последовательность полипептида-полиморфа INSP181-SV1N92T без этой предполагаемой сигнальной последовательности показана в виде SEQ ID NO: 46 и далее в тексте называется как "зрелый полипептид INSP181-SV1-N92T". Последовательность полипептидаполиморфа INSP181-SV1-G114S без этой предполагаемой сигнальной последовательности показана в виде SEQ ID NO: 60 и далее в тексте называется как "зрелый полипептид INSP181-SV1-N92T".

Последовательность полипептида, показанная в виде SEQ ID NO: 66, называется далее в тексте как "полипептид домена липокалина INSP181" и включает домен липокалина. Последовательность полипептида, показанная в виде SEQ ID NO: 70, называется далее в тексте как "полипептид домена липокалина INSP181-SV1" и включает сплайсинг-вариант домена липокалина.

Полипептиды по первому аспекту настоящего изобретения могут дополнительно содержать гистидиновую метку. Такая гистидиновая метка предпочтительно присутствует у С-конца данного полипептида. Предпочтительно такая гистидиновая метка содержит 1-10 гистидиновых остатков (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 остатков). Более предпочтительно указанная гистидиновая метка содержит 6 гистидиновых остатков. Соответственно, предпочтительными полипептидами являются такие полипептиды, которые включают последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 68 и/или SEQ ID NO: 72.

Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 28, называется далее в тексте как "полипептид INSP181 с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 30, называется далее в тексте как "зрелый полипептид INSP181 с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 32, называется далее в тексте как "полипептид INSP181-SV1 с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 34, называется далее в тексте как "зрелый полипептид INSP181-SV1 с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 48, называется далее в тексте как "полипептид-полиморф INSP181 N92T с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 50, называется далее в тексте как "зрелый полипептид-полиморф INSP181 N92T с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 52, называется далее в тексте как "полипептид-полиморф INSP181-SV1 N92T с гистидиновой меткой".

Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 54, называется далее в тексте как "зрелый полипептид-полиморф INSP181-SV1 N92T с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 62, называется далее в тексте как "полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 64, называется далее в тексте как "зрелый полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 68, называется далее в тексте как "полипептид домена липокалина INSP181 с гистидиновой меткой" и включает домен липокалина с гистидиновой меткой. Полипептид, имеющий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 72, называется далее в тексте как "полипептид домена липокалина INSP181-SV1 с гистидиновой меткой" и включает сплайсинг-вариант домена липокалина с гистидиновой меткой.

Термин "полипептиды INSP181" в контексте настоящего описания обозначает полипептиды, включающие зрелый полипептид экзона 1 INSP181, полипептид INSP181, зрелый полипептид INSP181, полипептид INSP181-SV1, зрелый полипептид INSP181-SV1, полипептид INSP181 с гистидиновой меткой, зрелый полипептид INSP181 с гистидиновой меткой, полипептид INSP181-SV1 с гистидиновой меткой, зрелый полипептид INSP181-SV1 с гистидиновой меткой, полипептид-полиморф INSP181 N92T, зрелый полипептид-полиморф INSP181 N92T, полипептид-полиморф INSP181-SV1-N92T, зрелый полипептидполиморф INSP181-SV1-N92T, полипептид-полиморф INSP181 N92T с гистидиновой меткой, зрелый полипептид-полиморф INSP181 N92T с гистидиновой меткой, полипептид-полиморф INSP181-SV1 N92T с гистидиновой меткой, зрелый полипептид-полиморф INSP181-SV1 N92T с гистидиновой меткой, полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S с гистидиновой меткой, зрелый полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S с гистидиновой меткой, полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S, полипептид домена липокалина INSP181 и полипептид домена липокалина INSP181-SV1 и его вариант с гистидиновой меткой.

Полипептиды, включая полипептиды домена липокалина, которые содержат и N92T, и G114S полиморфные варианты, также являются аспектами настоящего изобретения.

Полипептиды INSP181 и INSP181-SV1 содержат, предположительно, одинаковый сайт гликозилирования по аминокислоте 92 (фиг. 10), который также является местом локализации предполагаемого N92T полиморфизма. Замещение аспарагина в положении 92 будет препятствовать осуществлению Nгликозилирования. Наличие или отсутствие сахарных фрагментов может оказывать существенное влияние на функционирование полипептидов INSP181.

Авторы изобретения отметили наличие дисульфидной связи между цистеиновыми аминокислотными остатками 90 и 181. Полипептиды по настоящему изобретению, в которых указанные цистеиновые остатки связаны дисульфидной связью, включаются в область настоящего изобретения.

Термин "липокалин" относится к молекуле, содержащей по меньшей мере один домен липокалина.

Предпочтительно термин "липокалин" относится к молекуле, содержащей домен липокалина, выявляемый с показателем е-значения менее чем 0,1, 0,01, 0,001, 0,0001, 0,0002, 0,00001, 0,000001 или 0,0000001.

Предпочтительно термин "липокалин" относится к молекуле, спариваемой с НММ, созданным на основе базы данных Pfam entry, что выявляется с показателем е-значения менее чем 0,1, 0,01, 0,001, 0,0001, 0,0002, 0,00001, 0,000001 или 0,0000001.

Предпочтительно полипептид по любому из указанных выше аспектов настоящего изобретения функционирует как липокалин. Предпочтительно домен липокалина кодируется участком, соответствующим остаткам 41-189 в аминокислотной последовательности INSP181. Последовательность домена липокалина показана в виде SEQ ID NO: 66.

Другие полипептиды по настоящему изобретению включают фрагменты, которые важны для сохранения активности липокалина, и полипептиды, которые включают домен липокалина или состоят из домена липокалина, как показано на фиг. 14 (например, аминокислотные остатки 25-174, или аминокислотные остатки 26-180, или аминокислотные остатки 33-166) и на фиг. 11 (например, аминокислотные остатки 41-189), а также фрагмент, содержащий цистеиновые остатки, формирующие дисульфидную связь (например, аминокислотные остатки 96-187).

Другой полипептид по настоящему изобретению представляет собой домен липокалина, расположенный между остатками 25 и 181 в INSP181. В полипептиде TNSP181-SV1 домен липокалина расположен между остатками 25 и 206 и включает последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 70.

Термин "функция липокалина" используется в контексте настоящего описания для обозначения полипептидов, включающих аминокислотную последовательность или структурные особенности, которые могут быть идентифицированы как консервативные свойства в полипептидах семейства белков липокалинов, так что взаимодействие такого полипептида с его биологическим партнером, по существу, не будет оказывать вредного воздействия в сравнении с функционированием полноразмерного полипептида дикого типа. В частности, авторы относят к таким свойствам наличие цистеиновых остатков в определенных положениях полипептида, что создает возможность образования дисульфидных связей.

Липокалины используются в качестве диагностических и прогностических маркеров при различных болезненных состояниях. Плазменный уровень AGP отслеживают в ходе беременности и при проведении диагностической и прогностической оценки состояний, включающих химиотерапию рака, дисфункцию почек, инфаркт миокарда, артрит и рассеянный склероз. Ретинолсвязывающий белок (RBP) используют в клинической практике в качестве маркера канальцевой реабсорбции в почке, и аро D является маркером кистозно-фиброзной мастопатии.

Белок железы фон Эбнера также известен как слезный липокалин, слезный преальбумин или VEGP.

Аналогично другим липокалинам VEGP является переносчиком ретинола или других малых гидрофобных соединений. VEGP связывает ретинол in vitro и, как считается, выполняет антимикробную функцию в глазе частично, поскольку он связывает длинноцепочечные жирные кислоты, которые ингибируют активацию лизоцима (Glasgow, 1995 Arch. Clin. Exp. Ophtalmol. 233: 513-522). Данный белок может также инактивировать оболочечные вирусы, способствовать распределению по поверхности липидной пленки в глазе и/или защищать эпителий.

Другой член семейства липокалинов включает белок связывания ретиноевой кислоты в яичках (ERBP), который гомологичен по пространственной структуре ретинолсвязывающему белку в сыворотке крови (Newcomer et al. 1990 J. Biol. Chem. 265: 12876-12879). Считается, что ERBP играет важную роль в созревании спермы и проходит через яички. Было показано, что ERBP связывает большой перечень ретиноидов, включающих ретинол (витамин А), ретиналь, ретинил ацетат, бета-ионон, цис-ретиноиды, бета-каротин, холестерин, терпеноиды, бета-лонилиденацетат, длинноцепочечные сложные эфиры ретинола и ретиноевой кислоты (Flower, 1996 Biochem. J. 318: 1-14) in vivo и/или in vitro. Как было показано, ретиноиды выполняют важную роль в процессах клеточной дифференцировки и пролиферации, а также -4в функции зрения, в биологии размножения и в секреции слизи. Обзор материалов, посвященных ретиноидам и их роли в развитии заболеваний и в поддержании гомеостаза, приведен в работе Гудмана (Goodman, D., 1984 N. Engl. J. Med. 310: 1023-1031).

Синтаза простагландина D2, будучи членом семейства липокалинов, вовлекается в синтез простагландина D2 в мозге за счет катализа превращения простагландина Н2 в простагландин D2. Как и другие липокалины, синтаза PD2 является переносчиком гидрофобных соединений. Синтаза PD2 связывает ретинол in vitro и, как предполагается, выполняет функцию транспортной молекулы для секретируемых ретиноидов, которые циркулируют в различных жидкостях организма, доставляя их к соответствующим внутриклеточным переносчикам. Попадая внутрь клеток, ретиноиды связываются с димеризованным рецептором, выполняя в итоге свою биологическую роль по регуляции разнообразных процессов, таких как морфогенез, дифференцировка и митогенез (Tanaka et al., 1997, ibid).

Другие виды активности, ассоциированные с членами семейства липокалинов, включают антимикробную активность, транспортировку феромонов, активность в качестве модуляторов воспаления, участие в функции обоняния и регуляцию иммунного ответа, а также регуляцию развития нервной системы и антибактериальную активность.

Один из липокалинов, ассоциированных с модуляцией иммунной функции, представляет собой липокалин, ассоциированный с желатиназой нейтрофилов (NGAL). NGAL локализован в специфических гранулах в нейтрофилах, будучи как в виде мономеров, так и димеров (Bartsch et al., 1995 FEBS Letters 357: 255-259). NGAL является типичным липокалином по своей способности связывать малые гидрофобные молекулы для транспортировки их через гидрофильные жидкости. Хотя физиологический лиганд для NGAL еще не идентифицирован, было показано, что он связывает бактериальный фактор хемотаксиса FMLP, и это указывает на то, что, предположительно, данная молекула связывает липофильные воспалительные медиаторы (Bungaard et al., 1994 Biochem. Biophys. Res. Comm. 202: 1468-1475).

Настоящее изобретение основано на открытии того факта, что описываемые в изобретении полипептиды осуществляют положительную регуляцию Th2, более конкретно интерлейкина-10 (IL-10), интерлейкина-4 (IL-4) и интерлейкина-5 (IL-5). Кроме того, неожиданно было обнаружено, что полипептиды по настоящему изобретению демонстрируют неожиданно ограниченную экспрессию в образцах биопсии кожи, и в особенности в образцах биопсии кожи, взятых при псориазе.

Иммунные заболевания могут быть разделены на такие, при которых отмечается доминирование Т хелперных клеток 1 (Th1) или Т хелперных клеток 2 (Th2). Лекарственные средства могут влиять на Th1/Th2 баланс, что можно использовать для модификации рассматриваемого аутоиммунного заболевания.

В контексте настоящего описания Th1 заболевание определяется как заболевание, выбранное из болезни Крона, диабета типа I, болезни Хашимото, болезни Грейвса (тироидит), кожного заболевания Th типа, такого как псориаз или гиперкератозный дерматоз, ревматоидного артрита, пролиферативного гломерулонефрита и гломерулонефрита с клубочками полулунной формы, рассеянного склероза, увеита заднего отдела глазного яблока, заживления раны и/или саркоидоза.

Предпочтительно Th1 заболевание представляет собой псориаз.

Предпочтительно гиперкератозный дерматоз выбирают из псориаза, красного питириаза и/или порокератоза.

В контексте настоящего описания Th2 заболевание определяется как заболевание, выбранное из аллергических состояний, таких как аллергический ринит, астма, кожного заболевания Th2 типа, такого как плоский красный лишай, хронического синусита, синдрома Сезари, рака, лучевого кератоза, гепатита С, язвенного колита, мембранозного гломерулонефрита и/или вирусной инфекции.

Предпочтительно Th2 заболевание выбирают из атопического дерматита, контактного дерматита, контактной аллергии, например, к никелю или золоту, кожной Т-клеточной лимфомы, атопической экземы, острой экземы и/или хронической экземы.

Предпочтительно атопический дерматит представляет собой острый атопический дерматит.

Предпочтительно Th2 заболевание представляет собой атопический дерматит.

Предпочтительно рак выбирают из кожной Т-клеточной лимфомы, плоскоклеточной карциномы и/или базально-клеточной карциномы.

Не претендуя на какую-либо теорию, заявители лишь предполагают, что полипептид по настоящему изобретению, один или как часть белка слияния и/или как фрагмента, может переключать сдвиг Тклеточных цитокинов с Th1 на Th2.

В качестве такового полипептид по настоящему изобретению, один или как часть белка слияния и/или его фрагмента, может использоваться для лечения Th1 заболевания.

Не претендуя на какую-либо теорию, заявители лишь предполагают, что антагонист, например антитело против полипептида по настоящему изобретению, может переключать сдвиг Т-клеточных цитокинов с Th2 на Th1.

В качестве такового антагонист, например антитело против полипептида по настоящему изобретению, может использоваться для лечения Th2 заболевания. Например, усиленный Th2 иммунный ответ и образование цитокинов, таких как IL-4, IL-5 и IL-13, будут действовать в направлении индукции аллергии и астмы (Ngoc et al. Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 2005 Apr.; 5 (2): 161-6). В качестве такового для лечения астмы и/или аллергии.

Кроме стратегии направленного воздействия на клеточные механизмы при лечении псориаза используют методы терапии, связанные с гуморальной иммуномодуляцией, осуществляемой за счет воздействия на имеющееся в дисбалансе цитокинов доминирование цитокинов типа 1 с повышенным уровнем IL-2, -6, -8, TNF- или TNF-. Указанная модуляция может быть достигнута путем введения экзогенных дефицитных цитокинов типа 2 с противоположным регулирующим воздействием, таких как IL-4, -10 и -11, для отклонения процесса дифференцировки от продукции Т-клеточных цитокинов типа I к продукции Т-клеточных цитокинов типа II, которое стимулирует эндогенную дифференцировку лимфоцитов типа I до достижения нормального ответа. Не претендуя на какую-либо теорию, заявители лишь предполагают, что полипептиды по настоящему изобретению могут функционировать таким образом.

Лекарственные препараты, модулирующие продукцию цитокинов, таких как IL-4 или IL-10, известны в данной области, а введение рекомбинатных цитокинов, таких как IL-4, IL-10 и IL-11, рассматривается как способ лечения псориаза (Schleyer et al., J. Eur. Acad. Dermatol. Venerol., 2005 Jan.; 19 (1): 1-20).

Например, на начальной фазе испытаний 1b с использованием разных доз рекомбинатного IL-4 были получены впечатляющие результаты, указывающие на антипсориатический эффект препарата (Schleyer et al.). 20 человек из 22 пациентов, которым в течение 6 недель проводились еженедельно инъекции IL-4 в 5 разных дозах, завершили испытания, и у 1 пациента отмечались побочные реакции II степени. У 18 пациентов показатель PASI снизился на 60-80% в течение 6 недель и в течение 6-недельного периода наблюдений не отличался. Отмечалась зависимость улучшения от дозы у больных с псориазом, ассоциированная со снижением инфильтрации кожи и с нормализацией структуры эпидермиса. Такого рода первые результаты испытаний позволяют полагать, что описанный подход путем сдвига иммунного дисбаланса может быть очень удачной стратегией в лечении псориаза, поскольку затрагивает исключительно недавно активированные Т клетки.

В зоне псориатических поражений отмечается относительная недостаточность экспрессии кожного IL-10. Указанный Th2 цитокин является мощным ингибитором функций АРС, таких как пролиферация Т клеток. Он также подавляет продукцию цитокина типа I, включая IFN- или TNF-, и, в этой связи, выполняет необходимую роль в контроле воспалительных ответов кожи.

Можно полагать, что системное введение IL-10, как и в случае других видов традиционной терапии, такой как лечение с использованием производных сложных эфиров фумаровой кислоты, местного введения аналогов витамина D3 и УФ-облучение, которые действуют, в числе других, по механизму положительной регуляции эндогенного IL-10, будет эффективным при лечении псориаза за счет относительного восстановления баланса цитокинов.

Проведенные исследования показали, что липокалины могут быть полезны для лечения следующих заболеваний: расстройство зрения (например, ночная слепота), расстройства иммунной системы (например, аутоиммунные расстройства), воспалительные состояния, воспалительное заболевание кишечника (IBD), язвенный колит (UC), болезнь Крона (CD), проктит, клеточно-пролиферативные расстройства, рак (например, рак молочной железы, кожная Т-клеточная лимфома, плоскоклеточная карцинома и/или базально-клеточная карцинома), микробные инфекции (например, вирусные, бактериальные и грибные инфекции), кожные болезни (например, кожное заболевание, ассоциированное с Th1, такое как псориаз или гиперкератозный дерматоз; кожное заболевание, ассоциированное с Th2, такое как атопический дерматит, контактный дерматит, контактная аллергия, например, к никелю или золоту, кожная Т-клеточная лимфома, атопическая экзема, острая экзема и/или хроническая экзема), репродуктивные расстройства (например, бесплодие, в частности мужское бесплодие), дисфункция почки, инфаркт миокарда, артрит, рассеянный склероз, кистозно-фиброзная мастопатия, регуляция развития нервной системы, диабет типа I, болезнь Хашимото, болезнь Грейвса (тироидит), ревматоидный артрит, пролиферативный и гломерулонефрит с клубочками полулунной формы, увеит заднего отдела глазного яблока, заживление раны и/или саркоидоз, красный питириаз и/или порокератоз, аллергические расстройства, такие как аллергический ринит, астма, красный плоский лишай, хронический синусит, синдром Сезари, лучевой кератоз, гепатит С, язвенный колит, мембранозный гломерулонефрит и/или вирусные инфекции.

Считается, что INSP181 может принадлежать к подсемейству иммунокалинов и что ему присущи все функциональные свойства иммунокалинов, более конкретно свойства гликоделина (см., например, обзор Logdberg and Wester. Biochim. Biophys. Acta, 2000, 1482 (1-2): 284-97). Члены этого семейства кодируются генным кластером на участке q32-34 хромосомы 9 генома (INSP181) человека на участке q34.

Гликоделин вовлекается в процессы оплодотворения, иммуномодуляции и дифференцировки. Могут быть выявлены три основные изоформы гликоделина (GdA, GdS и GdF), придающие специфические функциональные свойства и определяющие важность гликозилирования для проявления биологической активности членов подсемейства иммунокалинов.

В документе WO 02/053701 описываются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие липокалин, и полипептиды липокалина (более конкретно - ген ЕР17 человека), которые могут использоваться для создания на мышах модели мужского бесплодия, для скрининга разрабатываемых лекарственных средств антитела против гликоделина А, используемые при лечении рака.

Предпочтительно активность полипептида по настоящему изобретению, одного или в качестве части белка слияния, или его фрагмента, и/или его антагониста, может быть подтверждена с использованием по меньшей мере одного из следующих тестов:

a) на моделях рака кожи, описанных в обзоре Одаширо с соавт. (Odashiro et al., Drug Discovery Today:

Disease Models 2005; в печати), или b) на моделях контактного дерматита или атопической экземы, описанных в обзоре Гутермута с соавт. (Gutermuth et al., Drug Discovery Today: Disease Models 2005; в печати), или c) на моделях атопического дерматита, описанных в обзоре Женга и Жу (Zheng and Zhu, Curr. Allergy Asthma Rep. 2005 Jul.; 5 (4): 291-7), или d) на модели мышей D6, описанной в работе Джемисона с соавт. (Jamieson et al., Nat. Immunol. Apr.; 6 (4): 403-11), или e) по процедуре количественного теста, позволяющего определить уровень цитокиновой секреции клетками МКПК, стимулированными Con А, описанной в примере 5. Более конкретно, активность полипептида по настоящему изобретению, одного или в качестве части белка слияния, или его фрагмента, и/или его антагониста, может быть подтверждена, если выявляется модуляция по меньшей мере одного из следующих цитокинов: IL-4, IL-5 и/или IL-10. Предпочтительно модуляции подвергаются два (например, IL-4 и IL-5; IL-4 и IL-10; или IL-5 и IL-10) или все три цитокина. Предпочтительно полипептид по настоящему изобретению, один или в качестве части белка слияния или его фрагмента, осуществляет положительную регуляцию одного или нескольких указанных выше цитокинов. Предпочтительно антагонист, например антитело против полипептида по настоящему изобретению, осуществляет отрицательную регуляцию одного или нескольких указанных выше цитокинов.

Активность полипептидов по настоящему изобретению, например INSP181, может быть определена по любому из методов, приведенных в настоящем описании или известных в данной области.

Полипептиды по первому аспекту настоящего изобретения могут дополнительно содержать гистидиновую метку. Такая гистидиновая метка предпочтительно присутствует у С-конца данного полипептида. Предпочтительно такая гистидиновая метка содержит 1-10 гистидиновых остатков (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 остатков). Более предпочтительно указанная гистидиновая метка содержит 6 гистидиновых остатков.

"Антигенная детерминанта" по изобретению может представлять собой часть полипептида по изобретению, которая связывается с антигенсвязывающим сайтом антитела или с Т-клеточным рецептором (TCR). Альтернативно, "антигенная детерминанта" может представлять собой сайт на поверхности полипептида по изобретению, с которым связывается одна молекула антитела. Вообще говоря, антиген имеет несколько или множество различных антигенных детерминант и реагирует с антителами, обладающими множеством различных специфичностей. Такое антитело предпочтительно является иммуноспецифичным к полипептиду по изобретению. Предпочтительно указанное антитело является иммуноспецифичным к полипептиду по изобретению, который не составляет часть гибридного белка. Предпочтительно указанное антитело является иммуноспецифичным к INSP181, INSP181-SV или к его фрагменту. Антигенные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как боковые цепи аминокислот или сахаров, и могут иметь специфические трехмерные структуры, а также определенный заряд. Предпочтительно термин "антигенная детерминанта" означает конкретную химическую группу на полипептиде по изобретению, которая является антигенной, то есть вырабатывает специфический иммунный ответ.

Во втором своем аспекте настоящее изобретение относится к очищенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид по первому аспекту изобретения.

Термин "очищенная молекула нуклеиновой кислоты" предпочтительно означает молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению, которая: (1) отделена по меньшей мере примерно от 50% белков, липидов, углеводов или других соединений, с которыми ассоциируется природная полноразмерная нуклеиновая кислота при ее выделении из клеток-источников; (2) не связана со всеми полинуклеотидами или с их частью, с которыми указанная "очищенная молекула нуклеиновой кислоты" ассоциируется в природе, (3) функционально присоединена к полинуклеотиду, с которым она не ассоциируется в природе; или (4) не встречается в природе как часть более крупной полинуклеотидной последовательности. Предпочтительно выделенная молекула нуклеиновой кислоты по изобретению, по существу, не содержит любой(ых) другой(их) примесной(ых) молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты или других примесей, которые присутствуют в ее природном окружении и могут препятствовать использованию этой нуклеиновой кислоты для продуцирования полипептидов, или ее терапевтическому, диагностическому или профилактическому применению, или применению в целях исследования.

Предпочтительный вариант изобретения, в частности, относится к геномных ДНК, которые не входят в объем настоящего изобретения. Предпочтительно геномная ДНК, в частности, имеющая размер более чем 10 т.п.н.(тысяч пар нуклеотидов), 50, 100, 150, 200, 250 или 300 т.п.н., не входит в объем изобретения. При этом предпочтительно, если такая "очищенная молекула нуклеиновой кислоты" состоит Предпочтительно очищенная молекула нуклеиновой кислоты состоит из или включает последовательность(ти) нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO: 1 (кодирующей полипептид экзона INSP181), SEQ ID NO: 3 (кодирующей полипептид экзона 2 INSP181), SEQ ID NO: 5 (кодирующей полипептид экзона 3 INSP181), SEQ ID NO: 7 (кодирующей полипептид экзона 3 INSP181-SV1), SEQ ID NO: (кодирующей полипептид экзона 4 INSP181-SV1), SEQ ID NO: 11 (кодирующей полипептид экзона INSP181), SEQ ID NO: 13 (кодирующей полипептид экзона 5 INSP181), SEQ ID NO: 15 (кодирующей полипептид экзона 6 INSP181), SEQ ID NO: 17 (кодирующей полипептид INSP181), SEQ ID NO: 19 (кодирующей зрелый полипептид экзона 1 INSP181), SEQ ID NO: 21 (кодирующей зрелый полипептид INSP181), SEQ ID NO: 23 (кодирующей полипептид INSP181-SV1), SEQ ID NO: 22 (кодирующей полипептид INSP181-SV1), SEQ ID NO: 27 (кодирующей полипептид INSP181 с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: 29 (кодирующей зрелый полипептид INSP181-SV1 с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: 31 (кодирующей полипептид INSP181-SV1 с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: 33 (кодирующей зрелый полипептид INSP181-SV1 с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: 35 (кодирующей полипептид-полиморф N92T экзона 3 INSP181), SEQ ID NO: 37 (кодирующей полипептид-полиморф N92T экзона 3 INSP181SV1), SEQ ID NO: 39 (кодирующей полипептид-полиморф INSP181-N92T), SEQ ID NO: 41 (кодирующей зрелый полипептид-полиморф INSP181-N92T), SEQ ID NO: 43 (кодирующей полипептид-полиморф INSP181-SV1 N92T), SEQ ID NO: 45 (кодирующей зрелый полипептид-полиморф INSP181-SV1 N92T), SEQ ID NO: 47 (кодирующей полипептид-полиморф INSP181 N92T с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: (кодирующей зрелый полипептид-полиморф INSP181 N92T с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: 51 (кодирующей полипептид-полиморф INSP181-SV1 N92T с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: 53 (кодирующей зрелый полипептид-полиморф INSP181-SV1 N92T с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: 55 (кодирующей полипептид-полиморф G114S экзона 4 INSP181-SV1), SEQ ID NO: 57 (кодирующей полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S), SEQ ID NO: 59 (кодирующей зрелый полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S), SEQ ID NO: 61 (кодирующей полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: 63 (кодирующей зрелый полипептид-полиморф INSP181-SV1 G114S с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: 65 (альтернативный нуклеотид экзона 2), SEQ ID NO: 67 (кодирующей полипептид домена липокалина INSP181), SEQ ID NO: 69 (кодирующей полипептид домена липокалина INSP181 с гистидиновой меткой), SEQ ID NO: 71 (кодирующей полипептид домена липокалина INSP181SV1) и/или SEQ ID NO: 73 (кодирующей полипептид домена липокалина INSP181-SV1 с гистидиновой меткой).

В своем третьем аспекте настоящее изобретение относится к очищенной молекуле нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в условиях высокой жесткости с молекулой нуклеиновой кислоты второго аспекта настоящего изобретения. Условия гибридизации высокой жесткости определяют как условия инкубирования в течение ночи при 42°С в растворе, содержащем 50% формамид, 5XSSC (150 мМ NaCl, 15 мМ тринатрийцитрат), 50 мМ фосфат натрия (рН 7,6), 5 раствор Денхардта, 10% сульфат декстрана и 20 мкг/мл денатурированной фрагментированной ДНК спермы лосося, с последующей промывкой фильтров в 0,1Х SSC приблизительно при 65°С.

В своем четвертом аспекте настоящее изобретение относится к вектору, такому как экспрессирующий вектор, который содержит молекулу нуклеиновой кислоты второго или третьего аспекта настоящего изобретения.

В своем пятом аспекте настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, трансформированной вектором четвертого аспекта настоящего изобретения.

В своем шестом аспекте настоящее изобретение относится к лиганду, который специфически связывается с полипептидом по первому аспекту изобретения и который предпочтительно ингибирует способность полипептида по первому аспекту изобретения переносить малые гидрофобные молекулы.

Лиганды для полипептидов по изобретению могут иметь различные формы, включая природные или модифицированные субстраты, ферменты, рецепторы, небольшие органические молекулы, такие как небольшие природные или синтетические органические молекулы размером до 2000 Да, а предпочтительно 800 Да или менее, пептидомиметики, неорганические молекулы, пептиды, полипептиды, антитела и их структурные или функциональные миметики.

Такие соединения могут быть идентифицированы с использованием описанных выше методов анализа и скрининга.

В своем седьмом аспекте настоящее изобретение относится к соединению, которое является эффективным с точки зрения изменения экспрессии природного гена, кодирующего полипептид по первому аспекту изобретения, или с точки зрения регуляции активности полипептида по первому аспекту изобретения.

Соединение по седьмому аспекту изобретения может либо повышать (служить агонистом), либо снижать (служить антагонистом) уровень экспрессии гена или активности полипептида.

Важно отметить, что идентификация функции полипептидов INSP181 дает возможность разработать способы скрининга, позволяющие идентифицировать соединения, эффективные для лечения и/или диагностики заболеваний. Лиганды и соединения по шестому и седьмому аспектам изобретения могут Соединения, идентифицированные как агонисты полипептидов по настоящему изобретению, могут использоваться для транспортировки малых гидрофобных молекул, in vitro или in vivo. Например, соединения-агонисты могут использоваться в качестве компонентов некоторых известных сред для культивирования клеток, для доставки малых гидрофобных молекул в клетки и для защиты их от разрушения ферментами, присутствующими в сыворотке крови.

Антагонисты (например, антитела) INSP181, INSP181-SV1, полиморфа INSP181 N92T, полиморфа INSP181-SV1 N92T и/или полиморфа INSP181-G114S могут использоваться при лечении рака, более конкретно рака, поражающего головной мозг, яичники, яичко, селезенку, поджелудочную железу, матку, кровь и/или легкое.

Предпочтительно антагонисты (например, антитела) INSP181-SV1, полиморфа INSP181-SV1 N92T или полиморфа INSP181-SV1 G114S (полученные с использованием кДНК слюнной железы, надпочечника и глаза) могут использоваться при лечении рака, в частности рака, поражающего слюнные железы, надпочечник и/или глаз.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к применению гена или полипептида INSP181 в качестве мишени для скрининга кандидатов на лекарственные средства-модуляторы, а в частности лекарственных средств-кандидатов, обладающих активностью, направленной против расстройств, ассоциированных с липокалином.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам скрининга соединений на возможность их применения для лечения расстройств, ассоциированных с липокалином, где указанные способы включают выявление способности указанного соединения связываться с геном, или полипептидом INSP181, или с их фрагментами.

Еще в одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам скрининга соединений на возможность их применения для лечения расстройств, ассоциированных с липокалином, где указанные способы включают анализ на модуляцию активности гена, или полипептида INSP181, или их фрагментов.

В своем восьмом аспекте настоящее изобретение относится к полипептиду по первому аспекту настоящего изобретения, или к молекуле нуклеиновой кислоты по второму или третьему аспекту настоящего изобретения, или к вектору по четвертому аспекту настоящего изобретения, или к клетке-хозяину по пятому аспекту настоящего изобретения, или к лиганду по шестому аспекту настоящего изобретения, или к соединению по седьмому аспекту настоящего изобретения, которые могут быть использованы для лечения или диагностики.

Фрагменты соединений по настоящему изобретению могут найти применение в производстве лекарственного средства для лечения некоторых заболеваний, включающих, без ограничения, расстройство зрения (например, ночную слепоту), расстройства иммунной системы (например, аутоиммунные расстройства), воспалительные состояния, воспалительное заболевание кишечника (IBD), язвенный колит (UC), болезнь Крона (CD), проктит, клеточно-пролиферативные расстройства, рак (например, рак молочной железы, кожную Т-клеточную лимфому, плоскоклеточную карциному и/или базально-клеточную карциному), микробные инфекции (например, вирусные, бактериальные и грибковые инфекции), эмфизему, кожные болезни (например, кожное заболевание, ассоциированное с Th1, такое как псориаз или гиперкератозный дерматоз; кожное заболевание, ассоциированное с Th2, такое как атопический дерматит, контактный дерматит, контактную аллергию, например, к никелю или золоту, кожную Т-клеточную лимфому, атопическую экзему, острую экзему и/или хроническую экзему), репродуктивные расстройства (например, бесплодие, в частности мужское бесплодие), дисфункцию почки, инфаркт миокарда, артрит, кистозно-фиброзную мастопатию, регуляцию развития нервной системы, диабет типа I, болезнь Хашимото, болезнь Грейвса (тироидит), ревматоидный артрит, пролиферативный гломерулонефрит и гломерулонефрит с клубочками полулунной формы, увеит заднего отдела глазного яблока, заживление раны и/или саркоидоз, красный питириаз и/или порокератоз, аллергические расстройства, такие как аллергический ринит, астма, плоский красный лишай, хронический синусит, синдром Сезари, актинический кератоз, гепатит С, язвенный колит, мембранозный гломерулонефрит и/или вирусные инфекции.

Приведенные далее в примерах анализы могут использоваться для идентификации терапевтически активных фрагментов.

В своем девятом аспекте настоящее изобретение относится к способу диагностики заболеваний у пациента, включающему оценку уровня экспрессии природного гена, кодирующего полипептид по первому аспекту изобретения, или оценку активности полипептида по первому аспекту изобретения в ткани указанного пациента и сравнение указанного уровня экспрессии или активности с контрольным уровнем, где уровень, который отличается от указанного контрольного уровня, является показателем заболевания.

Такой способ предпочтительно осуществляют in vitro. Аналогичные способы могут быть использованы для мониторинга терапевтического лечения заболевания у пациента, где изменение уровня экспрессии или активности молекулы полипептида или нуклеиновой кислоты в течение определенного периода времени по сравнению с контрольным уровнем служит показателем рецидива заболевания.

Более высокая экспрессия липокалинов может быть обнаружена у пациентов с кожными заболеваниями, такими как псориаз, в сравнении с пациентами, не имеющими такого заболевания, или у пациентов, которые подвергались воздействию аллергенов. Например, у пациентов, которые подвергались воздействию никеля или золота (контактная аллергия), определяют значительное повышение уровня желатиназы нейтрофилов, ассоциированной с липокалином (NGAL) (Moller et al. Contact Dermatitis. 1999 Apr.;

40 (4): 200-4). Положительная регуляция пептидов/полипептидов, таких как NGAL, также выявляется при заживлении раны и может служить объяснением экспрессии этих пептидов/полипептидов при псориазе и заживлении раны (Sorensen et al. J. Immunol. 2003 Jun. 1; 170 (11): 5583-9). Кроме того, выраженная индукция NGAL в эпидермисе наблюдается в случае многих кожных расстройств, характеризующихся разбалансировкой процесса дифференциации эпителия, таких как псориаз, красный питириаз и плоскоклеточная карцинома (Mallbris et al. Exp. Dermatol. 2002 Dec.; 11 (6): 584-91). Так, Маллбрис с соавт. (Mallbris et al.) делают вывод о том, что NGAL является маркером разбалансировки процесса дифференциации кератиноцитов в коже человека.

Таким образом, суперэкспрессия некоторых полипептидов по настоящему изобретению может коррелировать с прогрессированием заболевания и/или может служить прогностическим показателем его течения.

Считается, что некоторые ткани млекопитающих при заболевании Th1 типа или при заболевании Th2 типа содержат более высокое число копий гена для белка INSP181 и экспрессируют существенно повышенные уровни белка INSP181 и мРНК, кодирующей белок INSP181, в сравнении с соответствующим, "стандартным" млекопитающим, то есть с млекопитающим того же вида, но не имеющим заболевания Th1 типа или заболевания Th2 типа. Повышенные уровни белка INSP181 определяются в некоторых жидкостях организма (например, в сыворотке крови, плазме, моче, синовиальной жидкости и спинальной жидкости) и/или в коже млекопитающих, имеющих заболевание Th1 типа или заболевание Th типа, в сравнении с его уровнем в сыворотке/коже млекопитающих того же вида, но не имеющих заболевания Th1 типа или заболевания Th2 типа. Таким образом, настоящее изобретение относится к способу, используемому при диагностике заболевания Th1 типа или заболевания Th2 типа, который включает анализ уровня экспрессии гена, кодирующего белок INSP181, или числа копий гена в клетках млекопитающего, в частности в коже или в жидкости организма, и сравнение уровня экспрессии данного гена или числа копий гена со стандартными значениями уровня экспрессии гена или числа копий гена, где повышение уровня экспрессии гена или числа копий гена в сравнении со стандартными значениями является показателем некоторых заболеваний Th1 типа или заболеваний Th2 типа.

В том случае, когда заболевание Th1 типа или заболевание Th2 типа уже диагностировано традиционными методами, то настоящее изобретение может использоваться для целей прогноза.

Фраза "анализ уровня экспрессии гена, кодирующего белок INSP181" относится к качественному или количественному измерению или оценке уровня белка INSP181 или уровня мРНК, кодирующей INSP181, в первом биологическом образце либо непосредственно (например, путем определения или оценки абсолютного уровня белка или уровня мРНК), либо опосредованно (например, путем сравнения с уровнем белка или уровнем мРНК во втором биологическом образце). Фраза "анализ числа копий гена, кодирующего белок INSP181" относится к качественному или количественному измерению или оценке числа копий гена, кодирующего INSP181, в первом биологическом образце либо непосредственно (например, путем определения или оценки абсолютного числа копий гена), либо опосредованно (например, путем сравнения с числом копий гена, кодирующего белок INSP181, во втором биологическом образце).

Предпочтительно уровень белка INSP181, уровень мРНК или число копий гена в первом биологическом образце измеряют или оценивают и сравнивают со стандартным значением уровня белка INSP181, уровня мРНК или числа копий гена, где стандарт отбирают из второго биологического образца, полученного от индивидуума, не имеющего заболевания Th1 типа или заболевания Th2 типа. Альтернативно, в том случае, когда данный способ используют как прогностический показатель, и первый, и второй биологические образцы могут быть отобраны от индивидуумов, имеющих заболевание Th1 типа или заболевание Th2 типа, и могут быть измерены соответствующие значения уровней экспрессии или числа копий для определения прогноза заболевания. Как известно в данной области, когда известно стандартное значение уровня белка INSP181, уровня мРНК или числа копий гена, указанное значение может использоваться повторно, в качестве стандарта, для сравнения.

Термин "биологический образец" означает любой биологический образец, полученный от индивидуума, из клеточной линии, культуры ткани или другого источника, который содержит белок INSP или соответствующую мРНК, предпочтительно из кожи. Способы получения образцов биопсии из ткани и жидкостей тела млекопитающих известны в данной области. В том случае, когда биологический образец должен включать мРНК, образец биопсии ткани является предпочтительным источником.

Настоящее изобретение используется для выявления заболевания Th1 типа или заболевания Th типа у млекопитающих. В частности, настоящее изобретение используется при диагностике или для прогностической оценки у млекопитающих указанных выше типов Th1 заболевания или Th2 заболевания.

Предпочтительные млекопитающие включают обезьян, пчел, кошек, собак, коров, свиней, лошадей, кроликов и людей. Особенно предпочтительными являются люди.

Один возможный способ детекции полипептидов по первому аспекту изобретения включает стадии:

образцом в условиях, подходящих для образования комплекса лиганд-полипептид; и (b) детекции указанного комплекса.

Что касается девятого аспекта изобретения, то в этой связи следует отметить, что для детекции аномальных уровней белка существуют различные методы, известные читателю-специалисту, такие как методы гибридизации нуклеиновой кислоты с короткими зондами, методы анализа на точковую мутацию, метод амплификации с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и методы с использованием антител. Подобные методы могут быть использованы в короткий или продолжительный период времени, что позволяет проводить мониторинг терапевтического лечения заболевания у пациента. Настоящее изобретение также относится к наборам, которые могут быть использованы в указанных методах диагностики заболевания.

В своем десятом аспекте настоящее изобретение относится к использованию полипептида по первому аспекту изобретения в качестве липокалина.

Полипептиды по настоящему изобретению могут использоваться для связывания небольших молекул жирных кислот, например, в крови или тканях для модуляции их биологической функции. Полипептиды по настоящему изобретению могут использоваться для транспортировки ретиноидов или стероидов к рецепторам, в частности, в качестве составной части терапии при раке молочной железы, эмфиземе и заболеваниях кожи и играют важную роль в репродуктивном процессе. Другие варианты использования включают модуляцию противовоспалительных ответов, активность в качестве микробного агента либо как усилителя ферментативной функции, либо в качестве самой ферментоподобной молекулы.

Полипептиды по настоящему изобретению могут использоваться благодаря своим противомикробным свойствам. Противомикробная активность может быть измерена in vitro с использованием культуры клеток или in vivo путем введения молекул по настоящему изобретению в организм животного соответствующей модели. Анализы на выявление противомикробной активности являются специфичными для конкретных микробов и, в основном, известны специалистам в данной области. Например, анализ in vivo на противомикробную активность проводится путем внутрибрюшинной инокуляции мышам патогенных микроорганизмов в соответствующей бульонной среде. Сразу после инокуляции вводят композицию, содержащую данный полипептид, и регистрируют уровень смертности в течение 7 последующих дней. В основном, введение проводят внутривенным, подкожным, внутрибрюшинным способом или через рот.

См., например, работу Musiek et al., Antimicrobial Agents Chemother. 3: 40, 1973, в которой содержится обсуждение методов анализа противомикробных агентов in vivo и in vitro.

Активность полипептидов по настоящему изобретению может быть измерена с использованием большого числа методов анализа, которые позволяют определить их способность связывать малые гидрофобные молекулы. Такие методы анализа включают, без ограничения, методы анализа, основанные на определении изменений в интенсивности флуоресценции (Cogan et al., Eur. J. Biochem. 65: 71-78, 1976), и равновесный диализ водорастворимых соединений (Hase et al., J. Biochem. 79: 373-380, 1976).

Другие варианты использования молекул по настоящему изобретению включают использование их в качестве системы доставки для транспортировки и/или стабилизации малых липофильных молекул.

Например, молекулы по настоящему изобретению могут использоваться для микроинкапсулирования малой липофильной молекулы, которая образует активный фармакологический агент, и таким образом защищают данный агент от влияний экстремальных значений рН в кишке от воздействия мощных пищеварительных ферментов и последствий непроницаемости мембран желудочно-кишечного тракта для активного ингредиента. Другие преимущества инкапсулирования фармакологического агента включают предупреждение преждевременной активации агента или защиту его от агрессивной среды желудка.

В последнее время стали использовать складчатую структуру липокалина для создания белков, обладающих специфичностью для неприродных лигандов. Такие сконструированные липокалины могут рассматриваться как миметики антител и получили, в этой связи, название "антикалины" (см. обзор в работе Skerra, Biochim Biophys Acta. 2000 Oct. 18; 1482 (1-2): 337-50). Соответственно, полипептиды по настоящему изобретению могут найти применение в синтезе "антикалинов".

В своем одиннадцатом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей полипептид по первому аспекту изобретения, или молекулу нуклеиновой кислоты по второму или третьему аспекту изобретения, или вектор по четвертому аспекту изобретения, или клетку-хозяин по пятому аспекту изобретения, или лиганд по шестому аспекту изобретения, или соединение по седьмому аспекту настоящего изобретения, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

В своем двенадцатом аспекте настоящее изобретение относится к полипептиду по первому аспекту изобретения, или к молекуле нуклеиновой кислоты по второму или третьему аспекту изобретения, или к вектору по четвертому аспекту изобретения, или к клетке-хозяину по пятому аспекту изобретения, или к лиганду по шестому аспекту изобретения, или к соединению по седьмому аспекту изобретения, которые могут быть использованы в целях приготовления лекарственного средства для диагностики или лечения заболеваний, включая расстройства зрения (например, ночную слепоту), иммунные системные расстройства (например, аутоиммунные расстройства), воспалительную болезнь кишечника (IBD), язвенный колит (UC), болезнь Крона (CD), проктит, клеточно-пролиферативные расстройства, рак (например, рак эмфизему, заболевания кожи, репродуктивные расстройства (например, бесплодие, в частности мужское бесплодие), дисфункцию почки, инфаркт миокарда, артрит, рассеянный склероз, кистозно-фиброзную мастопатию и регуляцию нервной системы.

В своем тринадцатом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания у пациента, предусматривающему введение указанному пациенту полипептида по первому аспекту изобретения, или молекулы нуклеиновой кислоты по второму или третьему аспекту изобретения, или вектора по четвертому аспекту изобретения, или клетки-хозяина по пятому аспекту изобретения, или лиганда по шестому аспекту изобретения, или соединения по седьмому аспекту изобретения.

Полипептиды по настоящему изобретению могут использоваться сами по себе как компоненты гибридных белков, таких как гибридный белок Fc, и/или в сочетании с одним или несколькими агентами, действующими как отрицательные регуляторы Th1. Антагонисты, например антитело против полипептида по настоящему изобретению, могут использоваться сами по себе или в сочетании с одним или несколькими агентами, действующими как отрицательные регуляторы Th2.

Агенты, действующие как отрицательные регуляторы Th1 или Th2, известны в данной области и не ограничиваются указанными ниже агентами.

Предпочтительно агент, действующий как отрицательный регулятор Th1, выбирают из клеточных иммуномодуляторов, гуморальных иммуномодуляторов, полипептида Т, Mycobacterium vaccae, тазаротена, бексаротена, троглитазона, лиарозола, рамбазола, аргинина, оксида азота, циклоспорина, метотрексата, аналогов витамина D3, ретиноидов, кортикостероидов, антралина, дегтя, псоралена плюс UVA (PUVA), куркумина, полиподиума, лейкотомаса, глюкокортикоида, такого как предизон, и/или средств, оказывающих влияние на баланс Th1/Th2 (адаптогены), таких как изофлавоны сои, растительные стеролы, стеролины, пробиотики и/или прегненолон.

Предпочтительно клеточный иммуномодулятор выбирают из DAB389IL-2, микофенолята мофетила, VX-497, лефлуномида, эфализумаба, OKTedr4a, CTLA4-Ig, MEDI 507, LFA3TIP, даклизумаба, базиликсимаба, такролимуса, пимекролимуса и/или сиролимуса.

Предпочтительно гуморальный иммуномодулятор выбирают из IL-4, IL-10, IL-11, инфликсимаба, этанерцепта, онерцепта и/или адалимумаба.

Предпочтительно агент, действующий как отрицательный регулятор Th2, выбирают из антагонистов (например, антител) хемокинового рецептора CCR3 или CCR4, антагонистов CXCR4, анти-TARC, ингибиторов молекулы адгезии VLA-4, агонистов PPAR-, циклопентеноновых простагландинов, тиазолодиндионов, SB203580, SB239063, RWJ67657, аналогов витамина D3, глюкокортикоидов, микобактерий, анти-IL-5/IL-13/IL-9, растворимого IL-4R, ингибиторов CD80/86, лиганда ICOS, агониста Toll-подобного рецептора (TLR)-9, такого как CpG ДНК, CTLA4-Ig, антисмысловых олигонуклеотидов GATA3, Mycobacterium bacillus Calmette-Guerin (BCG), Mycobacterium vaccae, анти-IgE, агонистов бета рецептора, кортикостероидов, семян периллы, кверцетина, лютеолина, изофлавонов, глюкокортикоида, такого как предизон, и/или средств, гармонизирующих баланс Th1/Th2 (адаптогенов), таких как изофлавоны сои, растительные стеролы, стеролины, пробиотики и/или прегненолон. В случае заболеваний, при которых у данного пациента уровень экспрессии природного гена, кодирующего полипептид по первому аспекту изобретения, или уровень активности полипептида по первому аспекту изобретения ниже, чем соответствующий уровень экспрессии или активности у здорового пациента, полипептид, молекула нуклеиновой кислоты, лиганд или соединение, вводимые указанному пациенту, должны обладать агонистическими свойствами. И, наоборот, в случае заболеваний, при которых у данного пациента уровень экспрессии природного гена, кодирующего полипептид по первому аспекту изобретения, или уровень активности полипептида по первому аспекту изобретения выше, чем соответствующий уровень экспрессии или активности у здорового пациента, полипептид, молекула нуклеиновой кислоты, лиганд или соединения, вводимые указанному пациенту, должны обладать антагонистическими свойствами. Примерами таких антагонистов являются молекулы антисмысловой нуклеиновой кислоты, рибозимы и лиганды, такие как антитела.

Полипептиды INSP181 представляют собой липокалины, а поэтому они играют определенную роль в развитии многих патологических состояний. Антагонисты полипептидов INSP181 представляют особый интерес, поскольку они позволяют благоприятно воздействовать на динамику патологических состояний.

В своем четырнадцатом аспекте настоящее изобретение относится к трансгенным животным или к животным, которые являются дефицитными по полипептиду первого аспекта настоящего изобретения и не являются человеком и которые были трансформированы так, что они экспрессируют более высокие или более низкие уровни указанного полипептида или вообще не экспрессируют такого полипептида.

Указанные трансгенные животные являются наиболее подходящими моделями для исследования заболеваний и могут быть также использованы в способах скрининга в целях идентификации соединений, которые являются эффективными для лечения или диагностики данного заболевания.

Используемый здесь термин "функциональный эквивалент" означает молекулу белка или нуклеиновой кислоты, обладающую функциональными или структурными свойствами, в основном, аналогичными свойствам молекулы полипептида или нуклеиновой кислоты по изобретению. Функциональный - 12 эквивалент белка может содержать модификации, если такие модификации необходимы для осуществления конкретной функции. Термин "функциональный эквивалент" включает фрагменты, мутанты, гибриды, варианты, аналоги или химические производные молекулы.

Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты, обладающая любой одной или несколькими функциональными активностями полипептидов по изобретению.

Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты, обладающая активностью, которая, по существу, аналогична активности INSP181 или его фрагментов, измеренной в соответствующем анализе на биологическую активность или функцию. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты, обладающая активностью, которая идентична активности или превышает активность INSP181 или его фрагментов, измеренную в соответствующем анализе на биологическую активность или функцию. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты, обладающая активностью, которая составляет 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99, 100% или более от активности INSP181 или его фрагментов, измеренной в соответствующем анализе на биологическую активность или функцию.

Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть белок или полипептид, обладающий in vivo или in vitro активностью, которая, по существу, аналогична активности полипептидов по изобретению. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть белок или полипептид, способный взаимодействовать с другими клеточными или внеклеточными молекулами по механизму, который, по существу, аналогичен механизму взаимодействия соответствующей части полипептидов по изобретению. Так, например, в иммуноанализе "функциональный эквивалент" может способствовать снижению способности к связыванию антитела с соответствующим пептидом (то есть пептидом, имеющим модифицированную аминокислотную последовательность, а поэтому являющимся "функциональным эквивалентом") полипептида по изобретению или с самим полипептидом по изобретению, где указанное антитело вырабатывается против соответствующего пептида полипептида по изобретению. Эквимолярная концентрация указанного функционального эквивалента будет снижать уровень вышеупомянутого связывания соответствующего пептида по меньшей мере примерно на 5%, предпочтительно примерно на 5-10%, более предпочтительно примерно на 10-25%, еще более предпочтительно примерно на 25-30% и наиболее предпочтительно примерно на 40-50%.

Так, например, функциональные эквиваленты могут быть полностью функциональными либо у них может отсутствовать одна или несколько активностей. Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением модификации могут влиять на функцию, например на активности полипептида, которые подтверждают их идентификацию как домена лиопкалина.

Различные стандартные методы и процедуры, которые могут применяться для осуществления изобретения, систематизированы ниже. При этом следует отметить, что настоящее изобретение не ограничивается описанными конкретными методами, протоколами, клеточными линиями, векторами и реагентами. Следует также отметить, что используемая здесь терминология применяется только для описания конкретных вариантов изобретения и эта терминология не должна рассматриваться как ограничение объема настоящего изобретения. Объем изобретения ограничен только прилагаемой формулой изобретения.

В настоящем описании используются стандартные сокращения, принятые для обозначения нуклеотидов и аминокислот.

Если это не оговорено особо, то для осуществления настоящего изобретения используются стандартные методы молекулярной биологии и микробиологии, методы рекомбинантных ДНК и методы иммунологии, которые хорошо известны специалистам в данной области.

Более полное описание указанных методов можно найти в литературе. Так, например, наиболее подходящие описания, которые могут быть использованы в качестве консультации, приводятся в следующих работах: Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (1989), DNA Cloning, Volumes I and II (D.N. Glover ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization (B.D. Hames & S.J. Higgins eds. 1984); Transcription and Translation (B.D. Hames & S.J. Higgins eds. 1984); Animal Cell Culture (R.I. Freshney ed. 1986); Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press, 1986);

B. Perbal, A. Practical Guide to Molecular Cloning (1984); the Methods in Enzymology series (Academic Press, Inc.), especially volumes 154 & 155; Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.H. Miller and M.P. Calos eds. 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Mayer and Walker, eds. 1987, Academic Press, London); Scopes (1987) Protein Purification: Principles and Practice, Second Edition (Springer Verlag, N.Y.); and Handbook of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D.M. Weir and C.C. Blackwell eds. 1986).

Используемый здесь термин "полипептид" включает любой пептид или белок, содержащий две или более аминокислот, связанных друг с другом пептидными связями или модифицированных пептидными связями, то есть пептидными изостерами. Этот термин относится как к коротким цепям (пептидам или полипептидам), так и к более длинным цепям (белкам).

Полипептид настоящего изобретения может присутствовать в форме зрелого белка, либо он может пре-, про- или препрочасти этого белка с продуцированием активного зрелого полипептида. В таких полипептидах пре-, про- или препропоследовательность может представлять собой лидерную или секреторную последовательность либо она может представлять собой последовательность, используемую для очистки зрелой полипептидной последовательности.

Полипептид по первому аспекту изобретения может образовывать часть гибридного белка. Так, например, часто оказывается предпочтительным, чтобы данный полипептид включал одну или несколько дополнительных аминокислотных последовательностей, которые могут содержать секреторную или лидерную последовательности, пропоследовательности, последовательности, облегчающие очистку, или последовательности, сообщающие белку более высокую стабильность, например, во время рекомбинантного продуцирования. Альтернативно или дополнительно, зрелый полипептид может быть присоединен к другому соединению, такому как соединение, увеличивающее время полужизни указанного полипептида (например, к полиэтиленгликолю).

В частности, гибридный белок полипептида может содержать одну или несколько дополнительных аминокислотных последовательностей и фрагментов полипептидов по настоящему изобретению. Предпочтительно указанный фрагмент является доменом липокалина, например, представленным в виде SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 70 или в виде участка аминокислот 25-174, аминокислот 26-180, аминокислот 33или аминокислот 41-189 в SEQ ID NO: 18 или участка аминокислот 25-206 в SEQ ID NO: 24.

Предпочтительно полипептид по настоящему изобретению, содержащий последовательность, которая гомологична по меньшей мере на 85% полипептиду INSP181, является гибридным белком. Такие гибридные белки могут быть получены путем клонирования полинуклеотида, кодирующего полипептид, содержащий последовательность, которая гомологична по меньшей мере на 85% полипептиду INSP181, в рамке считывания с последовательностями, кодирующими гетерологичную белковую последовательность.

Используемый здесь термин "гетерологичный" означает любой полипептид, отличающийся от полипептида INSP181 человека. Примеры гетерологичных последовательностей, которые могут содержаться в гибридных белках, на амино- или карбоксиконце, включают внеклеточные домены связанного с мембраной белка, константные области иммуноглобулина (Fc области), домены мультимеризации, домены внеклеточных белков, сигнальные последовательности, экспортные последовательности и последовательности, позволяющие проводить очистку по методу аффинной хроматографии.

Многие из приведенных гетерологичных последовательностей коммерчески доступны в виде плазмид экспрессии, поскольку указанные последовательности обычно включаются в гибридные белки с тем, чтобы получить дополнительные свойства, не нарушив существенно специфической биологической активности слитого с ними белка (Terpe K., 2003, Appl. Microbiol. Biotechnol., 60: 523-33). Примеры таких дополнительных свойств включают увеличение полужизни в физиологических жидкостях, внеклеточную локализацию или облегчение процедуры очистки за счет наличия тяжа из гистидинов, образующих так называемую "гистидиновую метку" (Gentz et al. 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 821-4), или "НА" метки, эпитопа, полученного из белка гемагглютинина вируса гриппа (Wilson et al. 1994, Cell, 37: 767При необходимости гетерологичная последовательность может быть удалена при протеолитическом расщеплении, например, путем встраивания сайта протеолитического расщепления между белком и гетерологичной последовательностью, с последующей обработкой очищенного гибридного белка соответствующей протеазой. Указанные свойства особенно важны в случае гибридных белков, поскольку облегчают их получение и использование при изготовлении фармацевтических композиций. Так, например, использованный в примерах белок (зрелый полипептид INSP181; SEQ ID NO: 22) был очищен по процедуре, включающей присоединение гексагистидинового пептида к карбоксиконцу INSP181. В том случае, когда гибридный белок включает область иммуноглобулина, указанный гибрид может быть получен путем прямого присоединения компонентов или путем их присоединения посредством короткого линкерного пептида, длина которого может составлять по меньшей мере 1-3 аминокислотных остатка или более, например 13 аминокислотных остатков. Указанным линкером может быть, например, трипептид с последовательностью E-F-M (Glu-Phe-Met) или линкерная последовательность, состоящая из 13 аминокислот и содержащая последовательность Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met, встроенную между последовательностью веществ по настоящему изобретению и последовательностью иммуноглобулина. Полученный гибридный белок обладает улучшенными свойствами, такими как более длительное время его присутствия в физиологических жидкостях (например, увеличенное время полужизни), повышенная удельная активность, повышенный уровень экспрессии или способность указанного гибридного белка легко подвергаться очистке.

В предпочтительном варианте изобретения белок присоединяют к константной области молекулы Ig. Предпочтительно такой белок присоединяют к областям тяжелой цепи, таким как домены СН2 и СН3, например, IgG1 человека.

Для получения гибридных белков по изобретению могут быть также использованы и другие изоформы Ig, такие как изоформы IgG2 или IgG4, и изоформы других классов Ig, таких как, например, IgM или IgA. Гибридные белки могут быть мономерными или мультимерными, а также гетеро- или гомомультимерными.

меньшей мере один фрагмент, присоединенный к одной или нескольким функциональным группам, которые представлены в виде одной или нескольких боковых цепей на аминокислотных остатках. Предпочтительно указанным фрагментом является полиэтиленовый фрагмент (ПЭГ). ПЭГилирование может быть проведено с использованием известных методов, таких как методы, описанные, например, в WO99/55377.

Полипептиды могут содержать аминокислоты, которые отличаются от 20 аминокислот, кодируемых генами, и которые являются модифицированными либо в результате природных процессов, таких как посттрансляционный процессинг, либо в результате применения химических методов модификации, хорошо известных специалистам. Примерами известных модификаций, которые могут быть осуществлены в полипептидах настоящего изобретения, являются гликозилирование, присоединение липида, сульфирование, гамма-карбоксилирование, например, остатков глутаминовой кислоты, гидроксилирование и ADP-рибозилирование.

Другими возможными модификациями являются ацетилирование, ацилирование, амидирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение молекулы тема, ковалентное присоединение нуклеотида или нуклеотидного производного, ковалентное присоединение липидного производного, ковалентное присоединение фосфатидилинозита, перекрестное связывание, циклизация, образование дисульфидной связи, деметилирование, образование ковалентных перекрестных связей, образование цистеина, образование пироглутамата, формилирование, образование GPI-якоря, иодирование, метилирование, миристоилирование, окисление, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, рацемизация, селеноилирование, присоединение аминокислот к белкам, опосредуемое переносом РНК, такое как аргинилирование, и убихитинизация.

Модификации могут присутствовать в любой области полипептида, включая пептидный остов, аминокислотные боковые цепи и амино- или карбоксиконцы. Действительно, блокирование амино- или карбоксиконца в полипептиде либо того и другого посредством ковалентной модификации является обычным процессом, происходящим в природных и синтетических полипептидах, и такие модификации могут присутствовать в полипептидах настоящего изобретения.

Модификации, которые присутствуют в полипептиде, в большинстве случаев будут зависеть от способа получения данного полипептида. Для полипептидов, полученных рекомбинантным методом, природа и степень модификации, по большей части, будут определяться способностью к посттрансляционной модификации конкретной клетки-хозяина и присутствием сигналов модификации в аминокислотной последовательности рассматриваемого полипептида. Так, например, характер гликозилирования может варьироваться у клеток-хозяев различного типа.

Полипептиды настоящего изобретения могут быть получены любым подходящим способом. Такими полипептидами являются выделенные природные полипептиды (например, выделенные из клеточной культуры), полипептиды, продуцированные рекомбинантным методом (включая гибридные белки), синтетические полипептиды или полипептиды, продуцированные с использованием комбинации этих методов.

Функционально эквивалентные полипептиды первого аспекта настоящего изобретения могут представлять собой полипептиды, гомологичные полипептиду INSP181. Два полипептида могут быть определены используемым здесь термином "гомологичные", если последовательность одного из этих полипептидов имеет достаточно высокую степень идентичности или сходства с последовательностью другого полипептида. Термин "идентичность" означает, что в любом конкретном положении сопоставляемых последовательностей эти две последовательности имеют идентичные аминокислотные остатки. Термин "сходство" означает, что в любом конкретном положении сопоставляемых последовательностей, эти две последовательности имеют аминокислотные остатки аналогичного типа. Степень идентичности и сходства может быть легко вычислена (Computational Molecular Biology, Lesk A.M. ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing Informatics and Genome Projects, Smith D.W. ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin A.M. & Griffin H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G. Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribskov M. & Devereux J. eds, M. Stockton Press, New York, 1991).

Поэтому гомологичными полипептидами являются природные биологические варианты (например, аллельные варианты или варианты полипептидов, образовавшиеся в результате географических изменений видов, от которых эти полипептиды происходят) и мутанты (такие, как мутанты, содержащие аминокислотные замены, инсерции или делеции) полипептидов INSP181. Такими мутантами могут быть полипептиды, в которых один или несколько аминокислотных остатков заменены консервативным или неконсервативным аминокислотным остатком (предпочтительно консервативным аминокислотным остатком), и такой замененный аминокислотный остаток может быть, а может и не быть, остатком, кодируемым генетическим кодом. Обычно такие замены происходят между Ala, Val, Leu и Ile; между Ser и Thr;

между кислотными остатками Asp и Glu; между Asn и Gln; между основными остатками Lys и Arg или между ароматическими остатками Phe и Tyr. Особенно предпочтительными являются варианты, в которых несколько, то есть от 5 до 10, от 1 до 5, от 1 до 3, от 1 до 2 аминокислот, или только одна аминокислота являются замененными, делетированными или добавленными в любой комбинации. Особенно - 15 предпочтительными являются "молчащие" замены, добавления и делеции, которые не влияют на свойства и активность указанного белка. Также предпочтительными являются консервативные замены.

Такими мутантами также являются полипептиды, в которых один или несколько аминокислотных остатков имеют группу-заместитель.

В соответствии с настоящим изобретением любая замена должна быть предпочтительно "консервативной" или "допустимой" заменой, которую обычно определяют как замену, вводящую аминокислоты, имеющие аналогичные химические свойства (например, основная положительно заряженная аминокислота должна быть заменена другой основной, положительно заряженной аминокислотой), которые являются достаточными для сохранения структуры и биологической функции данной молекулы.

В литературе описано множество моделей, с помощью которых может быть осуществлен отбор консервативных аминокислотных замен, исходя из статистических и физико-химических исследований последовательности и/или структуры белков (Rogov S.I. и Nekrasov A.N., 2001). Эксперименты по конструированию белков показали, что использование специфических подпоследовательностей аминокислот позволяет продуцировать белки с соответствующей укладкой и активные белки и классифицировать аминокислотные "синонимичные" замены, которые могут легко адаптироваться к белковой структуре и которые могут быть использованы для детекции функциональных и структурных гомологов и паралогов (Murphy L.R. et al., 2000). Группы синонимичных аминокислот и группы более предпочтительных синонимичных аминокислот представлены в табл. I.

В полипептиды по изобретению также могут быть введены в различных целях специфические неконсервативные мутации. Мутации, снижающие аффинность CD24-подобного белка, допускают возможность повторного использования этих полипептидов, а также их применения в других целях, что потенциально повышает их терапевтическую эффективность. (Robinson C.R., 2002).

Иммуногенные эпитопы, фактически присутствующие в полипептидах по изобретению, могут быть использованы для разработки вакцин (Stevanovic S., 2002), либо они могут быть удалены путем модификации их последовательности известными методами отбора мутаций, повышающих стабильность белка, и их коррекции (van den Burg В. & Eijsink V, 2002; WO 02/05146, WO 00/34317 и WO 98/52976).

Предпочтительной альтернативой синонимичным группам для аминокислотных производных, включенных в пептидомиметики, являются группы, определенные в табл. II. Неисчерпывающий список аминокислотных производных также включает аминоизомасляную кислоту (Aib), гидроксипролин (Hyp), 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-COOH, индолин-2-карбоновую кислоту, 4-дифторпролин, L-тиазолидинкарбоновую кислоту, L-гомопролин, 3,4-дегидропролин, 3,4-дигидроксифенилаланин, циклогексилглицин и фенилглицин.

Термин "аминокислотное производное" означает аминокислоту, не входящую в 20 кодируемых генетическим кодом природных аминокислот, или химическую молекулу, подобную такой аминокислоте.

В частности, такое аминокислотное производное может содержать замещенные или незамещенные молекулы, молекулы с прямой цепью, молекулы с разветвленной цепью или циклоалкильные молекулы, а также может включать 1 или несколько гетероатомов. Указанные аминокислотные производные могут быть получены de novo, либо они могут быть взяты из коммерчески доступных источников (CalbiochemNovabiochem A.G., Switzerland; Bachem, USA).

Различные методы включения неприродных аминокислотных производных в белки с использованием in vitro и in vivo систем трансляции для зондирования и/или улучшения структуры и функции белков описаны в литературе (Dougherty D.A., 2000). Методы синтеза и получения пептидомиметиков, а также непептидомиметиков также хорошо известны специалистам (Golebiowski A. et al., 2001; Hruby V.J. & Balse P.M., 2000; Sawyer T.K. "Structure Based Drug Design", edited by Veerapandian P., Marcel Dekker Inc., pg. 557-663, 1997).

Обычно считается, что два полипептида, имеющих более чем 30%-ную идентичность, являются функционально эквивалентными. Предпочтительно, чтобы последовательности функционально эквивалентных полипептидов по первому аспекту изобретения были более чем на 70 или на 80% идентичны последовательностям полипептидов INSP181 или их активных фрагментов. Более предпочтительными являются полипептиды, имеющие степень идентичности более чем 85, 90, 95, 98, 98,5, 99 или 99,5%, соответственно.

Функционально эквивалентными полипептидами по первому аспекту изобретения могут быть также полипептиды, которые были идентифицированы с применением одного или нескольких методов структурного сопоставления первичных последовательностей путем их выравнивания. Так, например, технология информационной обработки потока геномных данных (Inpharmatica Genome Threader™), которая составляет один из аспектов способа поиска, используемых для генерирования базы данных поиска Biopendium, может быть применена (см. WO 01/67507) для идентификации полипептидов с неизвестными функциями, в отношении которых, несмотря на их низкую степень идентичности по сравнению с полипептидами экзона INSP181 или полипептидом INSP181 (SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 18), высказывается предположение, что они представляют собой липокалины, где указанное предположение основано на их значительной структурной гомологии с полипептидами экзона INSP181, полипептидом INSP181, полипептидом INSP-SV1, зрелым полипептидом INSP181, зрелым полипептидом INSP-SV1, полипептидом-полиморфом INSP181 N92T, зрелым полипептидом-полиморфом INSP181, полипептидом-полиморфом INSP181-SV1 N92T, зрелым полипептидом-полиморфом INSP181 N92T, полипептидом-полиморфом INSP181-SV1G114S или зрелым полипептидом-полиморфом INSP181-SV1G114S.

Термин "значительная структурная гомология" означает, что технология Inpharmatica Genome Threader™ позволяет предсказать структурную гомологию двух белков с достоверностью по крайней мере 10%, предпочтительно по крайней мере 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% и выше. Вероятностное значение по технологии Inpharmatica Genome Threader™ вычисляют следующим образом. Вначале проводят серию сравнений в рамках технологии Inpharmatica Genome Threader™ с использованием только последовательностей с известной структурой. Некоторые из сравнений проводят между белками, в отношении которых известно, что они являются близкородственными белками (на основании их структуры). Для этого был использован информационный поток по невральной сети, который обработали соответствующим образом с тем, чтобы наилучшим способом провести грань между близкородственными и неродственными вариантами, используя для этого структурную классификацию САТН (www.biochem.ucl.ас.uk/bsm/cath). В результате, данные по невральной сети были ранжированы по баллам от 0 до 1. При этом, поскольку количество близкородственных белков и количество неродственных белков было известно, было возможно распределить результаты анализа невральной сети по пакетам и эмпирически вычислить процент корректных результатов. Аналогично, в случае поисковой базы данных Biopendium, для любого точного предсказания берется балл, взятый из результатов анализа невральной сети, и процент доверительности указывает, насколько успешным было использование Inpharmatica Genome Threader™ для обработки/анализа исследуемой серии.

Полипептиды по первому аспекту изобретения также включает фрагменты полипептидов INSP и фрагменты функциональных эквивалентов полипептидов INSP181, при условии, что эти фрагменты являются липокалинами или имеют общую антигенную детерминанту с полипептидом INSP181, зрелым полипептидом INSP181, полипептидом INSP181-SV1, зрелым полипептидом INSP181-SV1, полипептидом-полиморфом INSP181 N92T, зрелым полипептидом-полиморфом INSP181, полипептидом-полиморфом INSP181-SV1 N92T, зрелым полипептидом-полиморфом INSP181 N92T, полипептидом-полиморфом INSP181-SV1G114S, зрелым полипептидом-полиморфом INSP181-SV1G114S, доменом липокалина INSP181 или доменом липокалина INSP181-SV1.



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
Похожие работы:

«МОСКОВСКИЙ ГОРОДСКОЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Фундаментальная библиотека Отдел информационного обслуживания Бюллетень новых поступлений в Фундаментальную библиотеку март 2014 г. Москва 2014 1 Составители: Т.А. Сенченко В бюллетень вошла учебная, учебно-методическая, научная и художественная литература, поступившая в Фундаментальную библиотеку в марте 2014 г. Материал расположен в систематическом порядке по отраслям знаний, внутри разделов – в алфавитнохронологическом. Указано распределение по...»

«Стр 1 из 180 7 апреля 2013 г. Форма 4 заполняется на каждую образовательную программу Сведения об обеспеченности образовательного процесса учебной литературой по блоку общепрофессиональных и специальных дисциплин Иркутский государственный технический университет ????12 Комплексная защита объектов информатизации Наименование дисциплин, входящих в Количество заявленную образовательную программу обучающихся, Автор, название, место издания, издательство, год издания учебной литературы, № п/п...»

«Департамент образования города Москвы ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ города МОСКВЫ МОСКОВСКИЙ ГОРОДСКОЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ СОГЛАСОВАНО проректор по научной работе МГПУ _ Е.Н. Геворкян _._2011 г. Рабочая программа дисциплины ИНФОРМАЦИОННО-КОММУНИКАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ОБРАЗОВАНИИ И НАУКЕ основной профессиональной образовательной программы послевузовского профессионального образования (аспирантура) по научной специальности...»

«ГОУ БАШКИРСКАЯ АКАДЕМИЯ ГОСУДАРСТВЕННОЙ СЛУЖБЫ И УПРАВЛЕНИЯ ПРИ ПРЕЗИДЕНТЕ РЕСПУБЛИКИ БАШКОРТОСТАН КАФЕДРА ИНФОРМАТИКИ 11редседатель ученого совета - ректор С.Н ITflRnPHTKPI С.Н. Лаврентьев 2011 г РАБОЧАЯ ПРОГРАММА УЧЕБНОЙ ДИСЦИПЛИНЫ ФД.А.01 ИНФОРМАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В НАУКЕ И ОБРАЗОВАНИИ (раздел ФД.А.00 Факультативные дисциплины) основной образовательной программы подготовки аспиранта (для всех специальностей) Всего учебных часов - 3 6, зач.ед. - Всего аудиторных занятий, час. - 18/ Всего...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тобольский государственный педагогический институт им. Д.И.Менделеева Кафедра информатики и методики преподавания информатики УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС ПО ДИСЦИПЛИНЕ КОМПЬЮТЕРНЫЕ НАУКИ направление 010200.62 – Математика. Прикладная математика специализация Компьютерная математика УМК составила: ст. преподаватель Оленькова...»

«РАБОЧИЕ ПРОГРАММЫ для студентов 1-го курса ускоренного обучения специальности Социальная педагогика Самара 2006 ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ САМАРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Кафедра педагогики РАБОЧИЕ ПРОГРАММЫ ДЛЯ СТУДЕНТОВ 1-ГО КУРСА УСКОРЕННОГО ОБУЧЕНИЯ СПЕЦИАЛЬНОСТИ СОЦИАЛЬНАЯ ПЕДАГОГИКА Самара Издательство Самарский университет Печатается по решению Редакционно-издательского совета Самарского...»

«5 марта 2008 года N 205-ПК ПЕРМСКИЙ КРАЙ ЗАКОН О БИБЛИОТЕЧНОМ ДЕЛЕ В ПЕРМСКОМ КРАЕ Принят Законодательным Собранием Пермского края 21 февраля 2008 года Настоящий Закон является правовой основой организации, сохранения и развития библиотечного дела в Пермском крае, устанавливает принципы деятельности библиотек, гарантирующие права человека на свободный доступ к информации, духовное развитие, приобщение к ценностям национальной и мировой культуры, а также на культурную, научную, образовательную и...»

«Министерство по образованию и науке Российской Федерации Владивостокский государственный университет экономики и сервиса _ А.А. СТЕПАНОВА Т.Ю. ПЛЕШКОВА Е.Г. ГУСЕВ МАТЕМАТИЧЕСКАЯ ЛОГИКА И ТЕОРИЯ АЛГОРИТМОВ Практикум Владивосток Издательство ВГУЭС 2010 ББК 22.12 С 79 Рецензенты: Г.К. Пак, канд. физ.-мат наук, проф. каф. алгебры и логики (ДВГУ); А.А. Ушаков, канд. физ.-мат. наук, доцент каф. математического моделирования и информатики (ДВГТУ) Степанова, А.А., Плешкова, Т.Ю., Гусев, Е.Г. С 79...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Филиал федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Кемеровский государственный университет в г. Анжеро-Судженске 1 марта 2013 г. РАБОЧАЯ ПРОГРАММА по дисциплине Психология и педагогика (ГСЭ.Р.3) для специальности 080801.65 Прикладная информатика в экономике факультет информатики, экономики и математики курс: 2 семестр: 4 зачет: 4 семестр лекции: 18 часов практические занятия: 18...»

«МИНОБРНАУКИ РОССИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ НОВОСИБИРСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ (НОВОСИБИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ, НГУ) Кафедра систем информатики Иван Валентинович Гурлев Пространственный анализ амплитуд отраженных продольных волн в азимутально-анизотропных средах МАГИСТЕРСКАЯ ДИССЕРТАЦИЯ по направлению высшего профессионального образования 230100.68 ИНФОРМАТИКА И...»

«МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им. М.В.ЛОМОНОСОВА ФАКУЛЬТЕТ ВЫЧИСЛИТЕЛЬНОЙ МАТЕМАТИКИ И КИБЕРНЕТИКИ А.М. ДЕНИСОВ, А.В. РАЗГУЛИН ОБЫКНОВЕННЫЕ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЕ УРАВНЕНИЯ Часть 2 МОСКВА 2009 г. Пособие отражает содержание второй части лекционного курса Обыкновенные дифференциальные уравнения, читаемого студентам факультета вычислительной математики и кибернетики МГУ им. М.В. Ломоносова в соответствии с программой по специальности Прикладная математика и информатика. c Факультет...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИНФОРМАЦИОННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ, МЕХАНИКИ И ОПТИКИ Факультет Информационных технологий и программирования Направление Прикладная математика и информатика Специализация : Математическое и программное обеспечение вычислительных машин Академическая степень магистр математики Кафедра Компьютерных технологий Группа 6538 МАГИСТЕРСКАЯ ДИССЕРТАЦИЯ на тему Автоматный подход к реализации элементов графического...»

«2.2. Основные итоги научной деятельности ТНУ 2.2.1.Выполнение тематического плана научных исследований университета Научная деятельность университета осуществлялась в соответствии с законом Украины О научной и научно-технической деятельности по приоритетным направлениям развития наук и и техники: КПКВ - 2201020 Фундаментальные исследования в высших учебных заведениях, КПКВ - 2201040 Прикладные исследования и разработки по направлениям научно-технической деятельности в высших учебных заведениях,...»

«РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ ТЮМЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ УТВЕРЖДАЮ: Первый проректор по учебной работе _ /Л.М. Волосникова/ _ 201г. НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА, включая научно-исследовательский семинар Учебно-методический комплекс для магистрантов программы Прикладная информатика в экономике очной формы обучения направления 230700.68 Прикладная...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Пермский государственный технический университет А.И. Цаплин, И.Л. Никулин МОДЕЛИРОВАНИЕ ТЕПЛОФИЗИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ И ОБЪЕКТОВ В МЕТАЛЛУРГИИ Утверждено Редакционно-издательским советом университета в качестве учебного пособия Издательство Пермского государственного технического университета 2011 1 УДК 53(0758) ББК 22.3 Ц17 Рецензенты: доктор физико-математических...»

«взаимодействующие поеледрвателш процессы Prentice-Hall InfernaHoB^il Series in Compuler Science Coitimtihicating Sequential Processes C. A. R. Hoare Professor of Computation Oxford University Prentice-Hall Englewood Cliffs, New Jersey London Mexico New Delhi Rio de Janeiro Singapore Sydney Tokyo Toronto Wellington Ч-Хоар Взаимодействующие последовательные процессы Перевод с английского А. А. Бульонковой под редакцией А. П. Ершова Москва Мир 1989 Б Б К 22.18 Х68 УДК 681.3 Хоар Ч. 'Х68...»

«РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. А.И. ГЕРЦЕНА ДИСТАНЦИОННОЕ ОБУЧЕНИЕ РУКОВОДСТВО ПРЕПОДАВАТЕЛЮ MOODLE РЕСУРСНОИНФОРМАЦИОННЫЙ ОТДЕЛ Санкт-Петербург 2009 УПРАВЛЕНИЕ ИНФОРМАТИЗАЦИИ РЕСУРСНО-ИНФОРМАЦИОННЫЙ ОТДЕЛ 2 УПРАВЛЕНИЕ ИНФОРМАТИЗАЦИИ РЕСУРСНО-ИНФОРМАЦИОННЫЙ ОТДЕЛ СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ РЕГИСТРАЦИЯ ПОДТВЕРЖДЕНИЕ РЕГИСТРАЦИИ АВТОРИЗАЦИЯ ДОБАВЛЕНИЕ КУРСА ДОБАВЛЕНИЕ РЕСУРСА ДОБАВЛЕНИЕ ЭЛЕМЕНТА КУРСА Добавление теста Добавление форума...»

«П 151-2.6.3-2010 ПЕНЗЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ПОЛОЖЕНИЕ О ПОДРАЗДЕЛЕНИИ П 151-2.6.3-2010 ПОЛОЖЕНИЕ О КАФЕДРЕ ИНФОРМАЦИОННО-ВЫЧИСЛИТЕЛЬНЫЕ СИСТЕМЫ Дата введения 2010-12-01 1 Основное назначение 1.1 Кафедра Информационно-вычислительные системы (далее – кафедра, ИВС) является структурным подразделением факультета вычислительной техники (далее – ФВТ) в составе Пензенского государственного университета. Кафедра непосредственно подчиняется декану ФВТ. 1.2 Кафедра организует и осуществляет...»

«МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ РАБОЧАЯ ПРОГРАММА дисциплины: Экономика для специальности 0808165 Прикладная информатика (по областям) Факультет: агрономический Ведущая кафедра: экономической теории Дневная форма обучения Вид учебной работы Курс, Всего часов семестр Лекции 1 курс, 2семестр Практич. занятия (семинары) 1 курс, 2семестр...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБОУ ВПО Кемеровский государственный университет Новокузнецкий институт (филиал) Факультет информационных технологий РАБОЧАЯ ПРОГРАММА ДИСЦИПЛИНЫ ОПД.Р.1 Безопасность жизнедеятельности для специальности 080801.65 Прикладная информатика (в экономике) Новокузнецк 2013 г. Сведения о разработке и утверждении рабочей программы дисциплины Рабочая программа дисциплины ОПД.Р.1 Безопасность жизнедеятельности национальнорегионального компонента цикла...»






 
© 2014 www.kniga.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Книги, пособия, учебники, издания, публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.